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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR扩增曲线异常
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misszwh

银虫 (小有名气)

[求助] QPCR扩增曲线异常 已有7人参与

我有对引物，普通PCR并电泳检测，条带很亮，大小也是我需要的，到了QPCR上，溶解曲线正常，扩增曲线很奇怪，没有CT值，你们遇到过吗？什么原因啊？金币不多啊，悬赏有限啊谢谢
QPCR扩增曲线异常
amplication plot.jpg


QPCR扩增曲线异常-1
melt curve.jpg
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1楼 2014-02-19 22:09:44
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

...
    Melt curve中的值太低，绝度不是需要的扩增产物，引物二聚体的可能很大。你如果觉得有疑问，大可拿此产物跑2~3%的琼脂糖胶看一下，看看分子量大小。
    如有说错，请高手指正
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Let God do with it as He wills
10楼2014-02-23 02:10:20
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-20 08:25:48
没遇到类似情况。
DNA电泳能看见条带，说明有产物。
溶解曲线还可以，但不是很尖锐，说明反应孔没有选错误。

会不会有污染？或者探针失效？
有没有正对照或负对照？结果都类似吗？
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-19 22:21:38
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-20 08:25:54
1）浓度太高了；2）就没有进行PCR酶活性成了问题；3）说不清的因素。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-02-19 22:31:06
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misszwh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-19 22:21:38
没遇到类似情况。
DNA电泳能看见条带，说明有产物。
溶解曲线还可以，但不是很尖锐，说明反应孔没有选错误。

会不会有污染？或者探针失效？
有没有正对照或负对照？结果都类似吗？

不会是污染的问题，我这对引物试了多次都是这个结果，内参引物的扩增是正常的。谢谢你的答复
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-20 00:53:02
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