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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 生平第一次PCR电泳图
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)

[交流] 生平第一次PCR电泳图 已有4人参与

这是小虫我第一次跑出来的电泳图，不会分析，也不知道此胶都存在什么问题，请论坛大拿们不吝赐教，谢谢
配的1%琼脂糖
中间marker为DL2000
条带顺序如下
目标基因-组3，目标基因-组2，目标基因-组1，目标基因-control，marker，GAPDH内参（control，组1，组2，组3）
生平第一次PCR电泳图
图片1.jpg
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1楼 2014-01-16 09:32:04
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-16 11:43:14
挺好的，不错了。凝胶成像对焦可能有点不太准，内参大小在100-200bp之间，大概有150bp吧，可以把凝胶浓度加大些，高到1.5%，估计小片段会更加清晰锐利，曝光可以再大些。
至于目标基因要是长度在8-90bp可能还算有东西，只是条带模糊，可能有点非特异扩增，优化下条件应该能有所改善。
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金币是赌出来的
2楼2014-01-16 09:54:13
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjswj at 2014-01-16 09:54:13
挺好的，不错了。凝胶成像对焦可能有点不太准，内参大小在100-200bp之间，大概有150bp吧，可以把凝胶浓度加大些，高到1.5%，估计小片段会更加清晰锐利，曝光可以再大些。
至于目标基因要是长度在8-90bp可能还算有东 ...

谢谢，目标基因长度大概90bp左右，内参191bp，电压150v，跑30min，准备今天重复一次PCR，昨天退火温度60,40个循环，这个PCR反应体系需要调整不？
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3楼2014-01-16 10:03:10
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15879003030

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
marker有点糊       目测是因为电压太高了。  要么就是没调好焦距
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4楼2014-01-16 14:33:36
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kaisa133

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2014-01-17 22:25:19
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fallenleafc

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-26 06:13:03
maker空心了 建议电压下降 到5～8V/cm
电泳液可以略多一点明显高于胶面2mm～4mm 比较好
由于不知道引物的TM值 建议调整退货温度 呃 条带不是很清楚 呃
延伸时间降下来 如果是那种1kb/min的酶 延伸缩短 比较有利于减少上面的大分子杂带的
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6楼2014-01-18 14:28:25
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fallenleafc at 2014-01-18 14:28:25
maker空心了 建议电压下降 到5～8V/cm
电泳液可以略多一点明显高于胶面2mm～4mm 比较好
由于不知道引物的TM值 建议调整退货温度 呃 条带不是很清楚 呃
延伸时间降下来 如果是那种1kb/min的酶 延伸缩短 比较有利于 ...

谢谢，过两天重复一下，看看~！
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7楼2014-01-21 14:55:36
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