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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙看看克隆后检测条带
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看看克隆后检测条带 已有2人参与

我做完克隆，然后菌落PCR检测，其中泳道1、8和11有我的目的条带，但是为什么在100bp以下还有一条两带呢？是引物二聚体吗？但是为什么会那么亮呢？
帮忙看看克隆后检测条带
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1楼 2013-12-31 15:40:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-02 08:38:44
是引物二聚体。菌落PCR的模板量不易控制，而且比较脏，容易影响PCR的扩增效率，有些引物二聚体是正常的。菌落PCR可以作为初筛，把阳性克隆提质粒进行进一步验证就可以了。
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4楼2014-01-01 05:53:50
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-02 08:38:40
用的什么引物做的菌落PCR，有可能是非特异扩增
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-31 15:51:54
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-31 15:51:54
用的什么引物做的菌落PCR，有可能是非特异扩增

用的是M13的通用引物。
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3楼2013-12-31 16:39:35
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