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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看看克隆后检测条带 已有2人参与

我做完克隆,然后菌落PCR检测,其中泳道1、8和11有我的目的条带,但是为什么在100bp以下还有一条两带呢?是引物二聚体吗?但是为什么会那么亮呢?
帮忙看看克隆后检测条带
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gyesang

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-02 08:38:40
用的什么引物做的菌落PCR,有可能是非特异扩增
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-31 15:51:54
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-31 15:51:54
用的什么引物做的菌落PCR,有可能是非特异扩增

用的是M13的通用引物。
3楼2013-12-31 16:39:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-02 08:38:44
是引物二聚体。菌落PCR的模板量不易控制,而且比较脏,容易影响PCR的扩增效率,有些引物二聚体是正常的。菌落PCR可以作为初筛,把阳性克隆提质粒进行进一步验证就可以了。
4楼2014-01-01 05:53:50
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