| 查看: 4916 | 回复: 8 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
反转录的cDNA没问题，但是实时定量PCR却不行。内参扩不出来啊。 已有4人参与
|
||||
|
反转录RNA，用得到的cDNA做了实时定量。cDNA的浓度结果都可以，260/280约为1.8，260/230约为2.2~2.38，浓度为1300~1500ng/ul.测浓度时的峰值也正常，只有260nm处有峰。但是，问题是，有的cDNA能正常扩增出内参基因，有的扩不出来。补充一下，内参没问题。这是什么原因啊？怎么解决啊？前辈们，请教。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] [ Last edited by 再见萤火虫89 on 2013-12-26 at 14:46 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有96人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求，pcr扩增cDNA时扩增出了基因组的片段。接下来该怎么办。
已经有4人回复
- 实时定量PCR的模板是mRNA还是cDNA好？
已经有6人回复
- 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？
已经有24人回复
- SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量，模版的要求
已经有11人回复
- 求助：相对定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA吗？
已经有4人回复
- microRNA反转录方面的
已经有4人回复
- 做miRNA定量PCR之前的反转录
已经有9人回复
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- 求助！实时定量PCR所有CT值都是undetermined，熔解曲线可以做出来
已经有18人回复
- 关于实时荧光定量引物设计
已经有5人回复
- 反转录后用cDNA做模板扩不出目的基因怎么办？？？
已经有6人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。
已经有28人回复
- 求助我反转录跑胶结果
已经有6人回复
- RT-PCR逆转录加模板问题
已经有9人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 求解：qPCR & RT-qPCR 的区别
已经有10人回复
- 做过RNAi或者实时定量的同学请帮助我解决一个问题，感激不尽
已经有14人回复
- PCR跑不出目的片段
已经有6人回复
- 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来
已经有9人回复
- 【求助/交流】实时定量内参无条带！
已经有7人回复
- RT-PCR后的cDNA呢？
已经有17人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2013-12-26 15:43:52
2楼2013-12-26 14:47:54
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
再见萤火虫89: 金币+5, ★有帮助 2013-12-26 15:43:12
感谢参与，应助指数 +1
再见萤火虫89: 金币+5, ★有帮助 2013-12-26 15:43:12
|
"cDNA的浓度结果都可以，260/280约为1.8~1.9，260/230约为2.2~2.3，浓度为1300~1500ng/ul.测浓度时的峰值也正常，只有260nm处有峰。" 一般是不测定cDNA浓度的，即使你测出值来也是不准确的，没有参考意义 cDNA的好坏取决于你做逆转录时的模板的质量和逆转录的过程，一般我们控制RNA的质量，判定RNA的浓度，纯度和完整度后不同样本取同量RNA做逆转录得到cDNA，然后再去等量cDNA去做realtime 现在你的问题是，有的cDNA能正常扩增出内参基因，有的扩不出来，我觉得可能还是你的扩不出来的那些样品的RNA提取的有问题，你可以check一下RNA，后再做判断 |
3楼2013-12-26 14:50:24
4楼2013-12-26 15:43:00
