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反转录的cDNA没问题，但是实时定量PCR却不行。内参扩不出来啊。 已有4人参与
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反转录RNA，用得到的cDNA做了实时定量。cDNA的浓度结果都可以，260/280约为1.8，260/230约为2.2~2.38，浓度为1300~1500ng/ul.测浓度时的峰值也正常，只有260nm处有峰。但是，问题是，有的cDNA能正常扩增出内参基因，有的扩不出来。补充一下，内参没问题。这是什么原因啊？怎么解决啊？前辈们，请教。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] [ Last edited by 再见萤火虫89 on 2013-12-26 at 14:46 ] |
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4楼2013-12-26 15:43:00
2楼2013-12-26 14:47:54
gyesang
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【答案】应助回帖
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再见萤火虫89: 金币+5, ★有帮助 2013-12-26 15:43:12
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再见萤火虫89: 金币+5, ★有帮助 2013-12-26 15:43:12
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"cDNA的浓度结果都可以，260/280约为1.8~1.9，260/230约为2.2~2.3，浓度为1300~1500ng/ul.测浓度时的峰值也正常，只有260nm处有峰。" 一般是不测定cDNA浓度的，即使你测出值来也是不准确的，没有参考意义 cDNA的好坏取决于你做逆转录时的模板的质量和逆转录的过程，一般我们控制RNA的质量，判定RNA的浓度，纯度和完整度后不同样本取同量RNA做逆转录得到cDNA，然后再去等量cDNA去做realtime 现在你的问题是，有的cDNA能正常扩增出内参基因，有的扩不出来，我觉得可能还是你的扩不出来的那些样品的RNA提取的有问题，你可以check一下RNA，后再做判断 |
3楼2013-12-26 14:50:24
cicelyzh
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5楼2013-12-26 15:43:52
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