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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物末端加A问题
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wwm2008505

金虫 (小有名气)

[交流] pcr产物末端加A问题

亲们，问一下，因为实验需要，pcr我用的pfu扩增的，想要测序连接在t19载体中，pcr产物需要末端加A,用什么酶加A效果好，谢谢
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1楼 2013-12-23 22:37:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-31 16:09:44
直接往PCR产物里面加入一个扩增体系，只是把酶换成普通的taq，然后72℃1h。加A效果不是很好，但也足够用了
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14楼2013-12-24 09:14:55
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 00:21:08
直接用普通的Taq酶就可以了
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4楼2013-12-23 23:22:29
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天猫天猫 at 2013-12-23 23:22:29
直接用普通的Taq酶就可以了

不同的taq酶加A效果怎么样。72°多长时间，谢谢
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5楼2013-12-23 23:49:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
用最普通的taq就可以，便宜且好用。
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7楼2013-12-24 02:26:02
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seeforme

新虫 (知名作家)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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10楼2013-12-24 04:18:35
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lastpython

木虫 (职业作家)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
Good luck
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11楼2013-12-24 04:21:41
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wendy3

金虫 (文坛精英)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
Best wishes
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12楼2013-12-24 04:23:40
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by sxxuan at 2013-12-24 09:14:55
直接往PCR产物里面加入一个扩增体系，只是把酶换成普通的taq，然后72℃1h。加A效果不是很好，但也足够用了

谢谢
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15楼2013-12-24 10:20:59
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mxdong12

金虫 (正式写手)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
ex吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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16楼2013-12-25 00:00:32
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
wwm2008505: 回帖置顶 2013-12-25 00:29:49
引用回帖:
16楼: Originally posted by mxdong12 at 2013-12-25 00:00:32
ex吧

谢谢，问了宝生物公司的。加A效果，ra Taq>ex Taq>LAtaq
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17楼2013-12-25 00:29:35
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sandisk411

新虫 (小有名气)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
pfu扩增完后，在里面直接加普通的Taq酶，70度孵育30以上。效果不错。
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19楼2013-12-25 13:50:21
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by sandisk411 at 2013-12-25 13:50:21
pfu扩增完后，在里面直接加普通的Taq酶，70度孵育30以上。效果不错。

谢谢
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20楼2013-12-25 14:06:14
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
extag就可以，takara的
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21楼2013-12-25 15:34:47
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-12-25 15:34:47
extag就可以，takara的

谢谢啦。成功了。
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22楼2013-12-25 16:35:41
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
wwm2008505(金币+1): 谢谢参与
除特别的酶以外，一般的Taq酶都会在扩增产物末端加个A。有且只有一个A。
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23楼2013-12-25 17:43:27
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wwm2008505

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-12-25 17:43:27
除特别的酶以外，一般的Taq酶都会在扩增产物末端加个A。有且只有一个A。

恩呢。我用的宝生物的HS酶也是不加A的。
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24楼2013-12-25 20:59:13
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doublehaohao2楼
2013-12-23 22:47   回复  
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风雨飘然3楼
2013-12-23 22:49   回复  
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cqwhch6楼
2013-12-24 00:11   回复  
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westlife9118楼
2013-12-24 02:27   回复  
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haixiawu9楼
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userhung13楼
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neu23418楼
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