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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 之前一直表达很好的一个蛋白表达不出来了，请求高手能给分析分析原因
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北国飘雪123

新虫 (初入文坛)

[求助] 之前一直表达很好的一个蛋白表达不出来了，请求高手能给分析分析原因

我的蛋白大小72Kd，连接在PET28a上，之前表达条件：IPTG：0.05mM，13℃诱导16h，目的蛋白在上清里能达到90%，而且表达量很大。我之前纯化过半年，师姐纯化过两年，都从来没有在上清里不表达的情况。现在是完全按照之前的条件纯化包括所用溶液也是一模一样，跑SDS胶发现只在沉淀里，上清里几乎一点也没有；我直接在收菌后用TBS重旋，破碎，离心，跑SDS胶也是一样的结果；我也试过不同的诱导温度也是一样的结果。现在是素手无策了，希望各位高手们能给点意见或是建议看我问题可能出哪里了
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1楼 2013-12-17 10:21:53
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青石向晚

木虫 (小有名气)
楼主这个问题解决了吗？我目前在做蛋白表达， 也碰到相同问题，目的蛋白在跑SDS-PAGE电泳时，无目的蛋白的条带，不知道是怎么回事了，以前表达时，诱导后在离心后的菌体的沉淀中是有目的蛋白的，但是现在完全看不到条带了
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有信心就有希望！！！！
2楼2014-10-30 21:05:14
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