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之前一直表达很好的一个蛋白表达不出来了，请求高手能给分析分析原因
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我的蛋白大小72Kd，连接在PET28a上，之前表达条件：IPTG：0.05mM，13℃诱导16h，目的蛋白在上清里能达到90%，而且表达量很大。我之前纯化过半年，师姐纯化过两年，都从来没有在上清里不表达的情况。现在是完全按照之前的条件纯化包括所用溶液也是一模一样，跑SDS胶发现只在沉淀里，上清里几乎一点也没有；我直接在收菌后用TBS重旋，破碎，离心，跑SDS胶也是一样的结果；我也试过不同的诱导温度也是一样的结果。现在是素手无策了 ，希望各位高手们能给点意见或是建议看 我问题可能出哪里了 |
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