应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手刚接触原核表达，蛋白Marker没有完全跑出来，请教一下高手，谢谢！
131/2返回列表12下一页
查看: 2395  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

黎末18

木虫 (小有名气)

[求助] 新手刚接触原核表达，蛋白Marker没有完全跑出来，请教一下高手，谢谢！

我刚开始接触原核表达，这是第一次做，跑SDS-PAGE凝胶电泳的时候，做了3次，Marker都没有完全跑出来，Marker是生工的BM201 Protein Marker Low Range(4.1-66kDa)，条带有9条，分别是66、45、35、27、20、14.4、9.5、6.5、4.1，我每次都只跑出来前4个条带，后面的就看不清了。5%的浓缩胶，15%的分离胶，配胶试剂都是生工的，1.5mm的板和梳子，11个孔的，加样20μl，电压先80，后120。
    我在网上看了看，有说到胶浓度的问题，Marker说明书上是15%，应该没错吧，新手还想不到更多的方面，所以想请教一下大家，请给个提示或建议，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-10 11:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黎末18(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:01:13
有可能是marker的质量问题，也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性？你的目标蛋白多大分子量？样品中的蛋白条带是否上sharp？15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿，分辨率不是很高是正常的，其余的条带应该是没问题的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-10 11:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myfinalway

木虫 (正式写手)
用NEB或者MBI的蛋白Marker吧，质量没有问题
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-10 12:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-10 11:38:15
有可能是marker的质量问题，也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性？你的目标蛋白多大分子量？样品中的蛋白条带是否上sharp？15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿，分辨率不 ...

谢谢你的帮助！你说的很有可能，我再试试换一管Marker，继续做胶。Marker是预变性过的，我直接加的；目标蛋白是27.8和16.3kDa；不好意思，有点弱弱的问一下，你是说我样品中的蛋白条带是不是清晰的是吗？这种英文的不太懂，见笑了，条带跑的都不太好，师兄说太丑了，没有照片。还有，是不是说4.1的已经快跑出去了？今天还在继续做，晚上看看结果
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-10 14:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by myfinalway at 2013-05-10 12:55:44
用NEB或者MBI的蛋白Marker吧，质量没有问题

谢谢！下次换一下试试
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-10 14:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
黎末18(gyesang代发): 金币+1, 鼓励应助交流！ 2013-05-11 12:04:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by 黎末18 at 2013-05-10 14:43:58
谢谢你的帮助！你说的很有可能，我再试试换一管Marker，继续做胶。Marker是预变性过的，我直接加的；目标蛋白是27.8和16.3kDa；不好意思，有点弱弱的问一下，你是说我样品中的蛋白条带是不是清晰的是吗？这种英文的 ...

如果条带不清晰，可能是胶的问题。你检查一下配分离胶的tris缓冲液的pH是否正确。4.1也不是说会出去，就是离溴酚蓝比较近，胶的分辨率不是很好。
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-11 02:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-11 02:00:55
如果条带不清晰，可能是胶的问题。你检查一下配分离胶的tris缓冲液的pH是否正确。4.1也不是说会出去，就是离溴酚蓝比较近，胶的分辨率不是很好。...

谢谢您！分离胶的tris-hcl的ph是8.8，用的是现成的试剂，4×的，我加的时候按1×稀释用的，今天的脱色还没完全透明，但是marker还是只能看见前4条，打算买新的预染的marker试试。刚开始有很多都不懂，这是第一次上来问，谢谢您的应助！
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-11 10:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 黎末18 at 2013-05-11 10:48:39
谢谢您！分离胶的tris-hcl的ph是8.8，用的是现成的试剂，4×的，我加的时候按1×稀释用的，今天的脱色还没完全透明，但是marker还是只能看见前4条，打算买新的预染的marker试试。刚开始有很多都不懂，这是第一次上 ...

你把跑胶的图传上来看看吧。有些公司的marker质量不好，有些条带看不到也是有可能的。
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-11 11:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-11 11:36:47
你把跑胶的图传上来看看吧。有些公司的marker质量不好，有些条带看不到也是有可能的。...

跑的特别特别难看，marker跑的不好，目的条带也没出来，看不到，这是27.8的那个，见笑了

IMG_20130513_105116_旋转.jpg
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-13 14:14:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你的胶可能有问题。确定缓冲液真的没有问题吗？灌胶后多长时间凝的？此外你跑的样品是全菌蛋白还是可溶蛋白？样品点样前是否离心？跑胶时溴酚蓝前沿是否整齐？
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-14 07:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 黎末18 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +5 shansx 2026-03-22 6/300 2026-03-22 13:01 by zhanglang93
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 求调剂院校信息 +5 CX 330 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:32 by 杨杨杨紫
[考研] 环境学硕288求调剂 +4 皮皮皮123456 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:07 by 杨杨杨紫
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭