应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手刚接触原核表达，蛋白Marker没有完全跑出来，请教一下高手，谢谢！
51/1返回列表
查看: 2399  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

黎末18

木虫 (小有名气)

[求助] 新手刚接触原核表达，蛋白Marker没有完全跑出来，请教一下高手，谢谢！

我刚开始接触原核表达，这是第一次做，跑SDS-PAGE凝胶电泳的时候，做了3次，Marker都没有完全跑出来，Marker是生工的BM201 Protein Marker Low Range(4.1-66kDa)，条带有9条，分别是66、45、35、27、20、14.4、9.5、6.5、4.1，我每次都只跑出来前4个条带，后面的就看不清了。5%的浓缩胶，15%的分离胶，配胶试剂都是生工的，1.5mm的板和梳子，11个孔的，加样20μl，电压先80，后120。
    我在网上看了看，有说到胶浓度的问题，Marker说明书上是15%，应该没错吧，新手还想不到更多的方面，所以想请教一下大家，请给个提示或建议，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-10 11:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-10 11:38:15
有可能是marker的质量问题，也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性？你的目标蛋白多大分子量？样品中的蛋白条带是否上sharp？15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿，分辨率不 ...

谢谢你的帮助！你说的很有可能，我再试试换一管Marker，继续做胶。Marker是预变性过的，我直接加的；目标蛋白是27.8和16.3kDa；不好意思，有点弱弱的问一下，你是说我样品中的蛋白条带是不是清晰的是吗？这种英文的不太懂，见笑了，条带跑的都不太好，师兄说太丑了，没有照片。还有，是不是说4.1的已经快跑出去了？今天还在继续做，晚上看看结果
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-10 14:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黎末18(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:01:13
有可能是marker的质量问题，也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性？你的目标蛋白多大分子量？样品中的蛋白条带是否上sharp？15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿，分辨率不是很高是正常的，其余的条带应该是没问题的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-10 11:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myfinalway

木虫 (正式写手)
用NEB或者MBI的蛋白Marker吧，质量没有问题
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-10 12:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by myfinalway at 2013-05-10 12:55:44
用NEB或者MBI的蛋白Marker吧，质量没有问题

谢谢！下次换一下试试
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-10 14:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭