24小时热门版块排行榜    

查看: 2973  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

黎末18

木虫 (小有名气)

[求助] 新手刚接触原核表达,蛋白Marker没有完全跑出来,请教一下高手,谢谢!

我刚开始接触原核表达,这是第一次做,跑SDS-PAGE凝胶电泳的时候,做了3次,Marker都没有完全跑出来,Marker是生工的BM201 Protein Marker Low Range(4.1-66kDa),条带有9条,分别是66、45、35、27、20、14.4、9.5、6.5、4.1,我每次都只跑出来前4个条带,后面的就看不清了。5%的浓缩胶,15%的分离胶,配胶试剂都是生工的,1.5mm的板和梳子,11个孔的,加样20μl,电压先80,后120。
    我在网上看了看,有说到胶浓度的问题,Marker说明书上是15%,应该没错吧,新手还想不到更多的方面,所以想请教一下大家,请给个提示或建议,谢谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-10 11:38:15
有可能是marker的质量问题,也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性?你的目标蛋白多大分子量?样品中的蛋白条带是否上sharp?15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿,分辨率不 ...

谢谢你的帮助!你说的很有可能,我再试试换一管Marker,继续做胶。Marker是预变性过的,我直接加的;目标蛋白是27.8和16.3kDa;不好意思,有点弱弱的问一下,你是说我样品中的蛋白条带是不是清晰的是吗?这种英文的不太懂,见笑了,条带跑的都不太好,师兄说太丑了,没有照片。还有,是不是说4.1的已经快跑出去了?今天还在继续做,晚上看看结果
4楼2013-05-10 14:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
黎末18(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 13:01:13
有可能是marker的质量问题,也有可能是你的胶做的不好。marker是预变性过的还是你自己做的变性?你的目标蛋白多大分子量?样品中的蛋白条带是否上sharp?15%的SDS-PAGE上4.1的marker条带可能有些接近前沿,分辨率不是很高是正常的,其余的条带应该是没问题的。
2楼2013-05-10 11:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myfinalway

木虫 (正式写手)

用NEB或者MBI的蛋白Marker吧,质量没有问题
3楼2013-05-10 12:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by myfinalway at 2013-05-10 12:55:44
用NEB或者MBI的蛋白Marker吧,质量没有问题

谢谢!下次换一下试试
5楼2013-05-10 14:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 14:22 by 0aDbZAghdVq9
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-15 07:23 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 02:48 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 8/400 2026-11-15 02:26 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-13 11:08 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请(市政/环境) +3 ladf 2026-11-12 3/150 2026-11-13 08:19 by Equinoxhua
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 13:02 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:25 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
信息提示
请填处理意见