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黎末18

木虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-14 07:32:22
你的胶可能有问题。确定缓冲液真的没有问题吗?灌胶后多长时间凝的?此外你跑的样品是全菌蛋白还是可溶蛋白?样品点样前是否离心?跑胶时溴酚蓝前沿是否整齐?

现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好,下次自己配一下,看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好,都凝了一个小时,但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝,感觉就像胶凝了,但沥出来了水一样,不知道你能懂我说的不?我跑的是全菌蛋白,这个图点样前没有离心,上次样品很粘稠吸不出来,离心之后加上也是这样的,有时候加样很不好加;跑胶的时候有一次是整齐的,这次的有点斜了。好多问题,麻烦您了,我真是太弱了,谢谢啦!
11楼2013-05-14 19:49:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
黎末18: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-16 09:01:44
引用回帖:
11楼: Originally posted by 黎末18 at 2013-05-14 19:49:44
现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好,下次自己配一下,看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好,都凝了一个小时,但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝,感觉就像胶凝了,但沥出来了 ...

你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题,你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊,这时正在凝胶,不要移动胶。一般凝30分钟到一个小时后,你应该看到模糊的界面逐渐变成非常清晰的一条水层和胶层分界线,这样就是表明胶凝好了。烧杯里残留的溶液比较少,与空气接触面大,胶凝的速度往往比灌在板间的胶慢。而且凝胶的反应会产生少量水,大概就是你说的有少量水分没有完全凝。
如果你的样品粘糊糊的,说明是样品浓度太大。因为做全菌蛋白一般就是直接用上样buffer破碎菌,没有超声步骤,样品中含有大量核酸,会使样品粘度很高。你在处理样品的时候对同样的菌体增加上样buffer的体积。而且点样前最好离心样品,以免有不溶物堵塞胶孔。
蛋白胶多跑跑经验多了就会好看的。
12楼2013-05-15 07:24:32
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黎末18

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-15 07:24:32
你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题,你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊,这时正在凝胶,不要移动胶。一般凝30分 ...

嗯,好的,知道了,谢谢您!您解释的真是详尽,真心谢谢您的帮助~
13楼2013-05-16 08:58:02
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