应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手刚接触原核表达，蛋白Marker没有完全跑出来，请教一下高手，谢谢！
132/2返回列表上一页12
查看: 2777  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-14 07:32:22
你的胶可能有问题。确定缓冲液真的没有问题吗？灌胶后多长时间凝的？此外你跑的样品是全菌蛋白还是可溶蛋白？样品点样前是否离心？跑胶时溴酚蓝前沿是否整齐？

现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好，下次自己配一下，看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好，都凝了一个小时，但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝，感觉就像胶凝了，但沥出来了水一样，不知道你能懂我说的不？我跑的是全菌蛋白，这个图点样前没有离心，上次样品很粘稠吸不出来，离心之后加上也是这样的，有时候加样很不好加；跑胶的时候有一次是整齐的，这次的有点斜了。好多问题，麻烦您了，我真是太弱了，谢谢啦！
赞一下 回复此楼
11楼2013-05-14 19:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
黎末18: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-16 09:01:44
引用回帖:
11楼: Originally posted by 黎末18 at 2013-05-14 19:49:44
现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好，下次自己配一下，看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好，都凝了一个小时，但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝，感觉就像胶凝了，但沥出来了 ...

你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题，你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊，这时正在凝胶，不要移动胶。一般凝30分钟到一个小时后，你应该看到模糊的界面逐渐变成非常清晰的一条水层和胶层分界线，这样就是表明胶凝好了。烧杯里残留的溶液比较少，与空气接触面大，胶凝的速度往往比灌在板间的胶慢。而且凝胶的反应会产生少量水，大概就是你说的有少量水分没有完全凝。
如果你的样品粘糊糊的，说明是样品浓度太大。因为做全菌蛋白一般就是直接用上样buffer破碎菌，没有超声步骤，样品中含有大量核酸，会使样品粘度很高。你在处理样品的时候对同样的菌体增加上样buffer的体积。而且点样前最好离心样品，以免有不溶物堵塞胶孔。
蛋白胶多跑跑经验多了就会好看的。
赞一下 回复此楼
12楼2013-05-15 07:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-15 07:24:32
你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题，你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊，这时正在凝胶，不要移动胶。一般凝30分 ...

嗯，好的，知道了，谢谢您！您解释的真是详尽，真心谢谢您的帮助~
赞一下 回复此楼
13楼2013-05-16 08:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 黎末18 的主题更新
132/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-31 00:42 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-31 00:34 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-31 00:21 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:41 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:19 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:08 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:08 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AVl0JAsg9hyo 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:57 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:53 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭