24小时热门版块排行榜    

查看: 2780  |  回复: 12

黎末18

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-14 07:32:22
你的胶可能有问题。确定缓冲液真的没有问题吗?灌胶后多长时间凝的?此外你跑的样品是全菌蛋白还是可溶蛋白?样品点样前是否离心?跑胶时溴酚蓝前沿是否整齐?

现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好,下次自己配一下,看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好,都凝了一个小时,但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝,感觉就像胶凝了,但沥出来了水一样,不知道你能懂我说的不?我跑的是全菌蛋白,这个图点样前没有离心,上次样品很粘稠吸不出来,离心之后加上也是这样的,有时候加样很不好加;跑胶的时候有一次是整齐的,这次的有点斜了。好多问题,麻烦您了,我真是太弱了,谢谢啦!
11楼2013-05-14 19:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
黎末18: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-16 09:01:44
引用回帖:
11楼: Originally posted by 黎末18 at 2013-05-14 19:49:44
现在有点怀疑买的现成的试剂说不上也不好,下次自己配一下,看是不是真的溶液有问题。灌胶后我怕凝不好,都凝了一个小时,但是我发现小烧杯里面就算凝一个小时也有少量水分没有完全凝,感觉就像胶凝了,但沥出来了 ...

你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题,你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊,这时正在凝胶,不要移动胶。一般凝30分钟到一个小时后,你应该看到模糊的界面逐渐变成非常清晰的一条水层和胶层分界线,这样就是表明胶凝好了。烧杯里残留的溶液比较少,与空气接触面大,胶凝的速度往往比灌在板间的胶慢。而且凝胶的反应会产生少量水,大概就是你说的有少量水分没有完全凝。
如果你的样品粘糊糊的,说明是样品浓度太大。因为做全菌蛋白一般就是直接用上样buffer破碎菌,没有超声步骤,样品中含有大量核酸,会使样品粘度很高。你在处理样品的时候对同样的菌体增加上样buffer的体积。而且点样前最好离心样品,以免有不溶物堵塞胶孔。
蛋白胶多跑跑经验多了就会好看的。
12楼2013-05-15 07:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎末18

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-15 07:24:32
你只要用pH计检查一下买的试剂的pH。配胶缓冲液的pH还是很重要的。
关于凝胶的问题,你灌好分离胶水封胶面后可以看到很清楚的水层和胶层分界面。过一阵子这个界面会变模糊,这时正在凝胶,不要移动胶。一般凝30分 ...

嗯,好的,知道了,谢谢您!您解释的真是详尽,真心谢谢您的帮助~
13楼2013-05-16 08:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 黎末18 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见