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北国飘雪123

新虫 (初入文坛)

[求助] 之前一直表达很好的一个蛋白表达不出来了,请求高手能给分析分析原因

我的蛋白大小72Kd,连接在PET28a上,之前表达条件:IPTG:0.05mM,13℃诱导16h,目的蛋白在上清里能达到90%,而且表达量很大。我之前纯化过半年,师姐纯化过两年,都从来没有在上清里不表达的情况。现在是完全按照之前的条件纯化包括所用溶液也是一模一样,跑SDS胶发现只在沉淀里,上清里几乎一点也没有;我直接在收菌后用TBS重旋,破碎,离心,跑SDS胶也是一样的结果;我也试过不同的诱导温度也是一样的结果。现在是素手无策了,希望各位高手们能给点意见或是建议看我问题可能出哪里了
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青石向晚

木虫 (小有名气)

楼主这个问题解决了吗?我目前在做蛋白表达, 也碰到相同问题,目的蛋白在跑SDS-PAGE电泳时,无目的蛋白的条带,不知道是怎么回事了,以前表达时,诱导后在离心后的菌体的沉淀中是有目的蛋白的,但是现在完全看不到条带了
有信心就有希望!!!!
2楼2014-10-30 21:05:14
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