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zzl2516

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线问题 已有4人参与

本人做荧光定量PCR,做标曲是5倍稀释了5个点,用的是两步法,95度15s,63度1分钟,但是标曲后两个点也就是浓度低的两个点总是有杂峰,不知道应该怎么调整反应条件,求大神指导
荧光定量PCR溶解曲线问题
这是5个点的溶解曲线
荧光定量PCR溶解曲线问题-1
荧光定量PCR溶解曲线问题-2
这是后两个点的溶解曲线
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物。我们用BIOG荧光定量PCR盒子检测了DNA,如果溶解曲线做出来只有单峰,且出锋位置是你的退火温度,那么这个是你的产物发出的荧光,实验结果表示有效。
9楼2020-02-18 11:18:46
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zzl2516

金虫 (小有名气)

没人回我。。自己顶一顶。。。
2楼2013-12-17 10:48:25
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2011210200

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-18 08:57:13
个人觉得,应该不是反应条件的问题,问题可能出在引物设计、和PCR体系配制的污染上。从你的溶解曲线上看,有很多峰值,说明有非特异性扩增或是大量的引物二聚体形成。
3楼2013-12-17 20:00:54
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

学习一下。我只遇到过一个杂峰的情况
求是
4楼2013-12-26 09:17:59
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