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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时定量PCR,一定要做标准曲线么?有什么作用?
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mfkwgeg

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时定量PCR,一定要做标准曲线么?有什么作用?

我是个实验新手,想问一下做实时定量PCR时,一定要做标准曲线么?一般做多大的体系呢?

[ Last edited by mfkwgeg on 2011-7-31 at 09:50 ]
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1楼2011-07-31 09:47:40
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-31 20:47:51
想定量就做标准曲线，仅定性就不用，体系大小无所谓，看个人，一般有20、25、40、50ul
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2楼2011-07-31 19:40:53
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

1949stone: 欢迎多多交流 2011-07-31 20:48:12
mfkwgeg(金币+1): 2011-07-31 22:59:01
楼主做相对定量吗？
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jiayoubashaonian
3楼2011-07-31 19:46:55
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daizi368

铜虫 (小有名气)
楼主做的是普通RT—PCR？QRT-PCR根本不用标准曲线吧。RT-PCR后琼脂糖电泳半定量分析，如果差别小的话很难看出区别的，建议上一个QRT
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4楼2011-08-01 09:09:55
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mfkwgeg

新虫 (初入文坛)
我是做相对定量,就是想看一下样品处理后不同时间段相关基因的表达量
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5楼2011-08-01 10:41:37
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-08-01 17:07:15
相对定量不需要做标准曲线的，标准曲线是用来做绝对定量的。我最近也在做QPCR，因为是相对定量，所以都没有做标曲。
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6楼2011-08-01 15:04:10
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我和我自己

铁虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流。标准曲线可以用来计算扩增效率，严谨的做法是每个基因起码测一次扩增效率，不过很多人都做相对定量都省这一步，包括偶…… 2011-08-01 17:09:26
如果只是做相对定量的，荧光定量PCR需要标准曲线进行校准，用control RNA做校准，不过一般不用你自己做，管仪器的老师会调整的
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7楼2011-08-01 16:03:04
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lixiaojing1318

银虫 (小有名气)
做相对定量开始的时候也是需要做下标准曲线的，大体看下是那个浓度合适
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8楼2011-08-11 11:41:44
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