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aofeng860308

木虫 (正式写手)


[交流] strep tag纯化,洗脱不下来

请教各位:
近期在做strep tag的标签蛋白纯化,GE的柱子,按产品说明书的方法进行操作,但是用2.5mM脱硫生物素(pH7.3和pH8.0)都么有蛋白被洗脱,用0.5M的NaOH进行再生时有蛋白峰被洗脱出,经SDS-PAGE检测基本确定为目的蛋白。
为什么在洗脱时么有蛋白被洗脱出,有么有改进的方法呢?
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gitme3388

铁虫 (知名作家)



aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
4楼2013-12-14 11:03:18
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-15 21:57:43
我以前用的时候是把脱硫生物素溶在buffer里面,buffer是Tris+NaCl,pH8.0。
14楼2013-12-14 12:46:35
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aofeng860308

木虫 (正式写手)


引用回帖:
14楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-14 12:46:35
我以前用的时候是把脱硫生物素溶在buffer里面,buffer是Tris+NaCl,pH8.0。

我也是这样做的,但就是洗脱不下来!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
17楼2013-12-15 12:16:26
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)


★ ★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 19:57:36
梯度和洗脱时间修改一下再看看呐。
另外不会是系统有问题了吧,比如流速不准、阀切换问题等
18楼2013-12-18 13:56:32
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鱼的泪920

新虫 (初入文坛)



aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
请问您是怎么洗脱下来的?现在我也遇到了这种问题。
19楼2017-08-06 15:22:22
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aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
脱硫生物素的浓缩加大到10mM,然后在加氯化钠洗脱试试。
20楼2017-08-08 10:50:01
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walking dead

金虫 (小有名气)



aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
听你的陈述,目标蛋白挂柱了。只是结合较强,不易洗脱。你试试增加一下洗脱液浓度,PH稍降试试。

发自小木虫Android客户端
21楼2017-08-10 12:47:01
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孟梦的雨

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
突然看到这个帖子,想请教楼主是如何解决的

发自小木虫Android客户端
24楼2021-08-13 10:12:23
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简单回复
2013-12-14 10:47   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
userhung3楼
2013-12-14 10:49   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
2013-12-14 11:20   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
2013-12-14 11:30   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
neu2347楼
2013-12-14 11:40   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
jiechen8楼
2013-12-14 11:46   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
1
haixiawu9楼
2013-12-14 11:50   回复  
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xiejf10楼
2013-12-14 12:01   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
2013-12-14 12:07   回复  
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2013-12-14 12:15   回复  
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1
flyxu13楼
2013-12-14 12:21   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
2013-12-14 14:57   回复  
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bbeerrss16楼
2013-12-14 15:12   回复  
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wyq17622楼
2017-08-10 13:59   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
wyq17623楼
2017-08-10 13:59   回复  
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