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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » strep tag纯化，洗脱不下来
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

[交流] strep tag纯化，洗脱不下来

请教各位：
近期在做strep tag的标签蛋白纯化，GE的柱子，按产品说明书的方法进行操作，但是用2.5mM脱硫生物素（pH7.3和pH8.0）都么有蛋白被洗脱，用0.5M的NaOH进行再生时有蛋白峰被洗脱出，经SDS-PAGE检测基本确定为目的蛋白。
为什么在洗脱时么有蛋白被洗脱出，有么有改进的方法呢？
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1楼 2013-12-14 10:39:09
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gitme3388

铁虫 (知名作家)
★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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4楼2013-12-14 11:03:18
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-15 21:57:43
我以前用的时候是把脱硫生物素溶在buffer里面，buffer是Tris+NaCl，pH8.0。
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14楼2013-12-14 12:46:35
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-14 12:46:35
我以前用的时候是把脱硫生物素溶在buffer里面，buffer是Tris+NaCl，pH8.0。

我也是这样做的，但就是洗脱不下来！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2013-12-15 12:16:26
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)
★ ★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 19:57:36
梯度和洗脱时间修改一下再看看呐。
另外不会是系统有问题了吧，比如流速不准、阀切换问题等
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18楼2013-12-18 13:56:32
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鱼的泪920

新虫 (初入文坛)
★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
请问您是怎么洗脱下来的？现在我也遇到了这种问题。
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19楼2017-08-06 15:22:22
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
脱硫生物素的浓缩加大到10mM，然后在加氯化钠洗脱试试。
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20楼2017-08-08 10:50:01
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walking dead

金虫 (小有名气)
★
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
听你的陈述，目标蛋白挂柱了。只是结合较强，不易洗脱。你试试增加一下洗脱液浓度，PH稍降试试。

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21楼2017-08-10 12:47:01
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孟梦的雨

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
突然看到这个帖子，想请教楼主是如何解决的

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24楼2021-08-13 10:12:23
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简单回复
doublehaohao2楼
2013-12-14 10:47   回复  
aofeng860308(金币+1): 谢谢参与
userhung3楼
2013-12-14 10:49   回复  
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zhchzhsh20765楼
2013-12-14 11:20   回复  
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xianzhi20106楼
2013-12-14 11:30   回复  
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neu2347楼
2013-12-14 11:40   回复  
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jiechen8楼
2013-12-14 11:46   回复  
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haixiawu9楼
2013-12-14 11:50   回复  
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xiejf10楼
2013-12-14 12:01   回复  
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峰锋风逢烽11楼
2013-12-14 12:07   回复  
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westlife91112楼
2013-12-14 12:15   回复  
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flyxu13楼
2013-12-14 12:21   回复  
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kiss2008553715楼
2013-12-14 14:57   回复  
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bbeerrss16楼
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wyq17622楼
2017-08-10 13:59   回复  
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wyq17623楼
2017-08-10 13:59   回复  
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