24小时热门版块排行榜    

查看: 2427  |  回复: 10

kycg

铜虫 (小有名气)

[求助] 疏水层析蛋白洗不下来怎么办

实验需要提纯蛋白,过离子交换层析后,接着过苯基-琼脂糖凝胶做疏水层析,用0.2M TRIS-HCL 1M硫酸铵ph=8.0缓冲液平衡后上样,用了0.2M TRIS-HCL,纯水洗脱都洗不完全,然后用0.5M的NAOH去洗,结果柱子上层还是有颜色,我的样品是淡黄色的,现在填料上的颜色也洗不掉。请教一下各位有没有什么洗脱的好方法。或者有什么方法能有效的减低疏水作用?谢谢!
回复此楼
找片树叶把天遮住
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
明天我帮你问问我的朋友啊
2楼2012-02-26 23:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingtsar

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

3楼2012-02-27 15:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
苯基疏水结合能力太强,是比较难洗脱,可以试下丁基、辛基、异丙基的疏水柱。再不行的话,可以试下用乙腈洗脱。
关注我关注的
4楼2012-02-27 20:37:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

0.2M的缓冲体系电导率已经很高了,应该超过10%,降低浓度较好。

苯基的吸附能力确实是强,可以试着用70%乙醇,或30%异丙醇强力清洗。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-02-27 23:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-02-27 23:11:57:
0.2M的缓冲体系电导率已经很高了,应该超过10%,降低浓度较好。

苯基的吸附能力确实是强,可以试着用70%乙醇,或30%异丙醇强力清洗。

请阅读说明书

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : HiPrep 16 10 Phenyl FF (high sub).pdf
  • 2012-02-27 23:13:23, 132.54 K
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-02-27 23:13:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

学习了
7楼2012-02-28 04:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我个人觉得,你洗的已经够了,那些有颜色的,不一定是蛋白啊。也可能是色素沉积。至于蛋白疏水性,你是不能改变很多的。你只能改变它挂的柱子。你可以试试butyl-s的柱子,phenyl的效果太强
8楼2012-03-02 11:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kycg

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-02-27 23:13:42:
请阅读说明书

谢谢指导!
找片树叶把天遮住
9楼2012-04-21 12:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的蛋白有辅基或辅酶吗,因为你说你的样品是有颜色的。如果有的话,可能是辅因子与柱子结合着,你蛋白早就洗脱掉了。
10楼2012-04-22 15:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kycg 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 7/350 2026-03-02 08:29 by houyaoxu
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪!?!
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见