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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 疏水层析蛋白洗不下来怎么办
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kycg

铜虫 (小有名气)

[求助] 疏水层析蛋白洗不下来怎么办

实验需要提纯蛋白，过离子交换层析后，接着过苯基-琼脂糖凝胶做疏水层析，用0.2M TRIS-HCL 1M硫酸铵ph=8.0缓冲液平衡后上样，用了0.2M TRIS-HCL，纯水洗脱都洗不完全，然后用0.5M的NAOH去洗，结果柱子上层还是有颜色，我的样品是淡黄色的，现在填料上的颜色也洗不掉。请教一下各位有没有什么洗脱的好方法。或者有什么方法能有效的减低疏水作用？谢谢！
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找片树叶把天遮住
1楼 2012-02-26 10:18:30
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明天我帮你问问我的朋友啊
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2楼2012-02-26 23:15:16
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kingtsar

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-02-27 15:28:58
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
苯基疏水结合能力太强，是比较难洗脱，可以试下丁基、辛基、异丙基的疏水柱。再不行的话，可以试下用乙腈洗脱。
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关注我关注的
4楼2012-02-27 20:37:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
0.2M的缓冲体系电导率已经很高了，应该超过10%，降低浓度较好。

苯基的吸附能力确实是强，可以试着用70%乙醇，或30%异丙醇强力清洗。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-02-27 23:11:57
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-02-27 23:11:57:
0.2M的缓冲体系电导率已经很高了，应该超过10%，降低浓度较好。

苯基的吸附能力确实是强，可以试着用70%乙醇，或30%异丙醇强力清洗。

请阅读说明书
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  • 附件 1 : HiPrep 16 10 Phenyl FF (high sub).pdf
    • 2012-02-27 23:13:23, 132.54 K
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-02-27 23:13:42
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
学习了
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7楼2012-02-28 04:59:23
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我个人觉得，你洗的已经够了，那些有颜色的，不一定是蛋白啊。也可能是色素沉积。至于蛋白疏水性，你是不能改变很多的。你只能改变它挂的柱子。你可以试试butyl-s的柱子，phenyl的效果太强
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8楼2012-03-02 11:21:15
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kycg

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-02-27 23:13:42:
请阅读说明书

谢谢指导！
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找片树叶把天遮住
9楼2012-04-21 12:38:01
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的蛋白有辅基或辅酶吗，因为你说你的样品是有颜色的。如果有的话，可能是辅因子与柱子结合着，你蛋白早就洗脱掉了。
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10楼2012-04-22 15:13:52
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