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kycg

铜虫 (小有名气)

[求助] 疏水层析蛋白洗不下来怎么办

实验需要提纯蛋白,过离子交换层析后,接着过苯基-琼脂糖凝胶做疏水层析,用0.2M TRIS-HCL 1M硫酸铵ph=8.0缓冲液平衡后上样,用了0.2M TRIS-HCL,纯水洗脱都洗不完全,然后用0.5M的NAOH去洗,结果柱子上层还是有颜色,我的样品是淡黄色的,现在填料上的颜色也洗不掉。请教一下各位有没有什么洗脱的好方法。或者有什么方法能有效的减低疏水作用?谢谢!
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找片树叶把天遮住
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我个人觉得,你洗的已经够了,那些有颜色的,不一定是蛋白啊。也可能是色素沉积。至于蛋白疏水性,你是不能改变很多的。你只能改变它挂的柱子。你可以试试butyl-s的柱子,phenyl的效果太强
8楼2012-03-02 11:21:15
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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明天我帮你问问我的朋友啊
2楼2012-02-26 23:15:16
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kingtsar

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2012-02-27 15:28:58
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
苯基疏水结合能力太强,是比较难洗脱,可以试下丁基、辛基、异丙基的疏水柱。再不行的话,可以试下用乙腈洗脱。
关注我关注的
4楼2012-02-27 20:37:22
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