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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR体系配制以及PCR程序的问题

各位大侠：想问关于PCR阳性产物做克隆过程中，菌落PCR的问题。
1、我原始PCR是Nest PCR，那么，在菌落PCR的时候，是不是：如果用1st PCR产物做的克隆，我就用与1st PCR相同的体系配制和PCR程序；相应的，如果用2nd PCR产物做克隆，就用2nd PCR的体系和程序来做菌落PCR？
2、菌落PCR的时候，为什么不需要提取DNA就可以直接做PCR了呢？
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越努力越幸运
1楼 2013-12-05 08:40:54
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 21:02:13
1. 鉴定阳性转化子的时候因该用插入片段的扩增引物检测，最好还能带上酶切检测。当然用2nd引物也能检测1st片段的克隆，但不如自己的引物靠谱吧。
2.细菌很脆弱的，在PCR仪里烫几下就破裂了，释放出DNA，尤其质粒DNA还是游离的。
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金币是赌出来的
2楼2013-12-05 09:48:29
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjswj at 2013-12-05 09:48:29
1. 鉴定阳性转化子的时候因该用插入片段的扩增引物检测，最好还能带上酶切检测。当然用2nd引物也能检测1st片段的克隆，但不如自己的引物靠谱吧。
2.细菌很脆弱的，在PCR仪里烫几下就破裂了，释放出DNA，尤其质粒DN ...

谢谢您！回答的很详细。
PCR程序是不变的吧？
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越努力越幸运
3楼2013-12-05 17:51:32
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