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柠檬可乐星

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[求助] 为什么不能用PCR克隆之后再PCR的阳性产物直接测序？

各位大侠：本人刚开始学做分子，菜鸟一枚。之前PCR得到的产物直接测序结果不好，想做一下克隆。我看克隆的操作步骤中，挑取一些单克隆做菌落PCR，然后PCR结果为阳性的菌落再培养，拿养好的菌液送测序。
我不是很了解菌液测序的原理，很好奇为什么不能用结果为阳性的菌落PCR产物直接测序，而是要再养菌，用菌液测序呢？
多谢指点！

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越努力越幸运

1楼 2013-12-04 19:59:02

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 解释的非常详细多谢 2013-12-05 08:22:43

PCR说白了就是体外复制DNA，会有出错的可能，尤其是PCR条件控制不严格的时候。细菌的DNA复制有严格的控制机理，尤其是用于克隆的工程菌株，质粒的复制几乎可以说不会出错。你已经克隆到菌里，目的是测定载体里携带的序列是否正确，用PCR产物测序如果出错可能是做菌落PCR时的错误，你仍然无法得知克隆的序列是否正确。用菌液测序是公司自己从菌里提模板进行测序，避免PCR获取模板时可能出现的错配。

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2楼2013-12-05 07:44:02

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