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汕头大学海洋科学接受调剂
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么不能用PCR克隆之后再PCR的阳性产物直接测序?

各位大侠:本人刚开始学做分子,菜鸟一枚。之前PCR得到的产物直接测序结果不好,想做一下克隆。我看克隆的操作步骤中,挑取一些单克隆做菌落PCR,然后PCR结果为阳性的菌落再培养,拿养好的菌液送测序。
我不是很了解菌液测序的原理,很好奇 为什么不能用 结果为阳性的菌落PCR产物直接测序,而是要再养菌,用菌液测序呢?
多谢指点!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 解释的非常详细 多谢 2013-12-05 08:22:43
PCR说白了就是体外复制DNA,会有出错的可能,尤其是PCR条件控制不严格的时候。细菌的DNA复制有严格的控制机理,尤其是用于克隆的工程菌株,质粒的复制几乎可以说不会出错。你已经克隆到菌里,目的是测定载体里携带的序列是否正确,用PCR产物测序如果出错可能是做菌落PCR时 的错误,你仍然无法得知克隆的序列是否正确。用菌液测序是公司自己从菌里提模板进行测序,避免PCR获取模板时可能出现的错配。
2楼2013-12-05 07:44:02
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