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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 两次体外转录所得的RNA,经电泳检测,大小不一样

以线性化DNA为模板进行体外转录,两次条件相同,但是转录出来的RNA大小不一样,是怎么个情况?
两次体外转录所得的RNA,经电泳检测,大小不一样
体外转录.jpg
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-03 22:17:15
1个可能,rna降解了,据观察电泳中没有rna的完整3条带。2,电泳跑歪了(据我观察,图2的marker也歪了)

亲,我这个不是提取组织的RNA,完全没有弥散现象,所以,不要动不动就说降解的事儿
3楼2013-11-03 22:19:31
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machao8405

木虫 (正式写手)

是左右两个图片相比较,一个图里的三个泳道是三个不同的东西,两副图大小差1000,不是简单的点样孔不齐和降解能解释的,况且片段较小的第一个土图 完全没有弥散的状况,反而条带边缘锐利清晰,条带很亮,这说明没有降解

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-11-03 22:50:51
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-04 10:55:02
胶孔位置不在一条线上...

胶浓度很低,被我捏的了
8楼2013-11-04 16:04:35
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machao8405

木虫 (正式写手)

你没明白我说的不一样是咋回事…左边三个本来就不是一个东西,是要跟右边三个比较的,左右两边marke 我大小都标出来了…你观察能力…诶

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2013-11-04 23:29:22
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by laojiu9878 at 2013-11-05 08:26:26
二级结构的出现,影响了转录的长度

我也这么认为,RNA有二级结构,影响了迁移速度,但是loading buffer不是有打开二级结构的作用么?而且两次的结果为啥二级结构不一样呢?  两次实验最可能不一样的地方就是胶的浓度可能不太一样,还有就是在产物在冰上的放置时间不太一样,但是这些也都差的不远,而且每次的三个产物位置都是相近的,不知道转录出来的东西是不是我要的
12楼2013-11-05 10:04:54
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-12 13:23:31
大哥 您这体外转录成的RNA是跑普通琼脂糖凝胶电泳检测的吗 不是体外转录成的RNA是单链吗怎么能跑呢?望赐教,谢谢!

谁说单链不能电泳
18楼2014-08-12 14:27:23
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machao8405

木虫 (正式写手)

任何核酸结合EB的原理应该都类似吧,都是EB插入结合到核酸上,具体没深究过
20楼2014-08-13 17:29:19
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