[求助] 求助菌落PCR的5个问题

1.菌落pcr用不用热解，简单的沸水浴？
2.将扩增的目的片段与T载体链接，转化用的感受态细胞是大肠DH5α，最后平板上能长出多大比率的正确菌落呢？
3.菌落pcr所用的引物是采用针对扩增片段的引物为好还是采用载体上的通用引物比较好呢？
4.菌落pcr对酶有没有要求?用普通的Taq即可，还是用高保真？或者其他的什么酶？pcr体系和之前扩增目的片段的体系相同？（扩增时用高保真，菌落pcr用的话有点浪费）
5目的片段是从乳酸菌里扩增出来的，大肠感受态细胞也正好有我的目的片段，没有对比这两个序列一不一样，但是名称一样，菌落pcr还可行吗？

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1楼 2013-10-12 14:28:34

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yang0071

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-13 18:09:02

1 不用
2 90%以上
3    扩增片段的引物
4    用普通的Taq即可
5    可行性不高，但可以试试

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