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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达外源蛋白后测酶活相关问题
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lovehejuhua

银虫 (小有名气)

[求助] 表达外源蛋白后测酶活相关问题

1，最近构建了一株菌成功表达了外源蛋白，接下来整细胞催化测酶活，初步测具有活性，能够催化底物生成产物，但是一直在纠结怎么计算酶活单位，我是用 整个细胞进行催化的，细胞是离心后没0.1g用1Ml缓冲液重悬起来，再投入一定浓度的底物进行催化，请教各位该怎么计算酶活？,
2，另外，还有一个问题，我把重悬的细胞一直都是在4度保存着，这样的细胞还具有催化能力吗？每次摸索催化条件难道我都要重新培养收集菌体了以后才能进行反应么？这样不是很麻烦，有什么方法可以让细胞保持一定的活力？以便下次反应的时候可以直接使用上次收集的菌体
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Courage is not the absence of fear...
1楼 2013-10-11 10:21:20
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一问。你的问题的有关没得信息太少，不过既然是外分泌的酶蛋白，测其活性当然是把其提取出来在测定活性。

第二问。无法回答，信息不足。
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2楼2013-10-11 10:45:07
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-15 10:47:30
要定量，必须知道多少酶参与了反应，要纯化出足够纯的酶来算 。

保存细菌，还是其他的细胞？ 4度保存的话，如果细胞死了，里面的水解酶会水解一切蛋白，包括你的目的蛋白。还是纯化酶后，试管分装，-20度或者-80度保存为妥。
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2013-10-11 12:20:07
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lovehejuhua

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-11 12:20:07
要定量，必须知道多少酶参与了反应，要纯化出足够纯的酶来算 。

保存细菌，还是其他的细胞？ 4度保存的话，如果细胞死了，里面的水解酶会水解一切蛋白，包括你的目的蛋白。还是纯化酶后，试管分装，-20度或者-80 ...

保存菌体就是保存细胞啊，我用的是整细胞催化，不破碎提取酶出来催化的呢，所以想着有什么方法能够最长时间保存细胞，使得下次使用细胞催化的时候还具有活性
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Courage is not the absence of fear...
4楼2013-10-14 15:40:01
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