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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么要用合成的基因进行蛋白外源表达呢？
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peaches

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么要用合成的基因进行蛋白外源表达呢？

师姐说现在进行蛋白的外源表达，目的基因最好选择全基因合成方式，而不是克隆的方式，请问这是为什么呢？
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1楼 2013-06-25 17:15:29
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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peaches(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:49:13
gyesang: 回帖置顶 2013-06-26 12:49:24
并不是一定要全合成，关键看你的实验设计。如果你准备在哺乳动物细胞中（如HEK293，CHO等)表达真核基因，一般不需要全合成，直接克隆或购买克隆你目的基因的质粒（国内可以从origene购买）。如果基因较长（大于1000bp)，购买可能比合成便宜，周期还短。
如果你准备在E.coli中表达真核基因，可能需要考虑密码子优化的问题，如果你的目的基因片段（天然）含有大量的E.coli稀有密码子，建议进行全基因优化并合成
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3楼2013-06-25 23:35:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这只能说明一个问题，你们有钱
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7楼2013-06-26 16:13:07
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，密码子优化的确不是全能的 2013-06-27 16:09:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by peaches at 2013-06-26 16:10:41
如果我的基因是全基因合成然后外源表达，那么可以如实写进文章吗？
我还没看到有人写明所表达的基因是全基因合成的呢。...

那是你看的文献还不够多。不过，合成的不一定就会高表达，即使选择了所谓的偏爱密码子。影响表达的又岂只是密码子的问题 ，别花了很多钱又表达不好，传说中的DNA2.0公司尚且不能保证都是高表达，普通的公司就仅省下会合成个基因罢了。
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为什么
9楼2013-06-27 10:15:18
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般送公司全合成有三种情况：1、含目的基因的基因组不能得到；2、异源表达，基因密码子需要优化；3、经费多的花不了。
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12楼2013-06-28 10:39:33
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-25 19:09:59
如果说选择全基因合成方式有什么好处的话就是密码子可以进行优化，选用宿主偏爱密码子，并通过密码子优化除去一些基因内部的酶切位点，有利于外源表达。
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2楼2013-06-25 18:51:37
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peaches

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-06-25 23:35:11
并不是一定要全合成，关键看你的实验设计。如果你准备在哺乳动物细胞中（如HEK293，CHO等)表达真核基因，一般不需要全合成，直接克隆或购买克隆你目的基因的质粒（国内可以从origene购买）。如果基因较长（大于1000 ...

嗯，是打算真核基因在E.Coli中表达。目的基因是否具有较多的E.Coli稀有密码子，我还不确定。
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4楼2013-06-26 16:07:16
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peaches

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-06-25 18:51:37
如果说选择全基因合成方式有什么好处的话就是密码子可以进行优化，选用宿主偏爱密码子，并通过密码子优化除去一些基因内部的酶切位点，有利于外源表达。

如果我的基因是全基因合成然后外源表达，那么可以如实写进文章吗？
我还没看到有人写明所表达的基因是全基因合成的呢。
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5楼2013-06-26 16:10:41
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peaches

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-06-25 23:35:11
并不是一定要全合成，关键看你的实验设计。如果你准备在哺乳动物细胞中（如HEK293，CHO等)表达真核基因，一般不需要全合成，直接克隆或购买克隆你目的基因的质粒（国内可以从origene购买）。如果基因较长（大于1000 ...

写文章时全基因合成可以写进试验方法吗？会不会不被认可？谢谢大侠
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6楼2013-06-26 16:12:08
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peaches

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-26 16:13:07
这只能说明一个问题，你们有钱

没钱怎么办呢？有无没钱的办法？
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8楼2013-06-27 08:39:00
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peaches

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 547star at 2013-06-27 10:15:18
那是你看的文献还不够多。不过，合成的不一定就会高表达，即使选择了所谓的偏爱密码子。影响表达的又岂只是密码子的问题 ，别花了很多钱又表达不好，传说中的DNA2.0公司尚且不能保证都是高表达，普通的公司就仅省下 ...

哦，那我先以克隆的基因试一试，不行的话在全基因合成。不过公司说现在做外援蛋白表的一般都是选择全基因合成。
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10楼2013-06-27 19:39:29
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