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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 测定胃蛋白酶活力时候的问题
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

[求助] 测定胃蛋白酶活力时候的问题

小弟最近测定胃蛋白酶的活力，在配置2%的酪蛋白溶液时候出现下面的问题：
用0.1mol/lNaOH溶液溶解，在加热的情况下能全溶，可是最后要求定容时用酸性缓冲液（pH=2.5），原先溶解的酪蛋白都成为絮状沉淀了，于是还是只能用酸性溶液溶解，可是在酸性清况下，无论如何它也不溶。。现在也在抓头中- -
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1楼 2012-06-27 10:03:50
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fhang0427

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
树树8013: 金币+2, 老虫友，老朋友。谢谢解答。版主奖励。 2012-06-27 22:36:37
酪蛋白的pI =4.6，pH=2.5时，当然酪蛋白聚集絮凝了
底物应该改变可采用变性酪蛋白、变性血球蛋白、FITC-酪蛋白或叠氮酪蛋白试试，这些都是测定蛋白水解活力常用底物，也可合成肽为底物进行分析
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2楼2012-06-27 20:29:21
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ssdghf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fhang0427 at 2012-06-27 20:29:21
酪蛋白的pI =4.6，pH=2.5时，当然酪蛋白聚集絮凝了
底物应该改变可采用变性酪蛋白、变性血球蛋白、FITC-酪蛋白或叠氮酪蛋白试试，这些都是测定蛋白水解活力常用底物，也可合成肽为底物进行分析

变性酪蛋白，是怎么变性的，有这种产品卖吗？它们在4.6就不沉淀吗？
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3楼2012-06-28 10:28:50
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和龟赛跑的人

木虫 (小有名气)
请问你的缓冲液是乳酸缓冲液吗？那你的乳酸及乳酸钠是在哪买的，其含量是国标上的吗
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4楼2013-05-06 10:31:47
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yefangping

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 和龟赛跑的人 at 2013-05-06 10:31:47
请问你的缓冲液是乳酸缓冲液吗？那你的乳酸及乳酸钠是在哪买的，其含量是国标上的吗

跟乳酸缓冲液的含量有关》？
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5楼2013-05-27 10:31:33
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和龟赛跑的人

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yefangping at 2013-05-27 10:31:33
跟乳酸缓冲液的含量有关》？...

没有，我只是想问你的，跟你上面的问题无关
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6楼2013-05-28 19:45:44
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yefangping

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 和龟赛跑的人 at 2013-05-28 19:45:44
没有，我只是想问你的，跟你上面的问题无关...

嗯目前也是遇到干酪素在酸性条件pH2的时候都不溶解。。。。叫我如何测定胃蛋白酶的酶活
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7楼2013-05-30 10:36:30
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yefangping

新虫 (初入文坛)
你如果单纯想测定胃蛋白酶的酶活的话可以换底物的换成牛血红蛋白可以测定。有很多文献都可以找到
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8楼2013-05-30 10:37:50
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小蒋

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pH=2.5时，你使用的酪蛋白已经变性了，所以聚集絮凝，建议改用改性过的酸性酪蛋白，这样的酪蛋白直接有的卖的
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我想我会的。
9楼2013-05-30 18:34:24
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jiaguosen

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

胃蛋白酶活力检测，用牛血红蛋白的方法在药典上有，但在低pH下如如何溶解牛血红蛋白？这是我目前遇到的问题，楼主是否解决了?
牛血红蛋白溶于水，用低pH的缓冲液时变为絮状沉淀。
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10楼2013-09-30 09:20:21
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