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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 不同类别的蛋白酶的活力测定
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

[交流] 不同类别的蛋白酶的活力测定已有8人参与

根据GB23527-2009蛋白酶制剂方法，测定方法中蛋白酶缓冲液分为三种磷酸、乳酸、硼酸，pH分别为7.5、10.5、3.0，分别用于稀释中性、碱性、酸性蛋白酶。
问题是，如果这几个pH都不是酶活的最适pH，同一温度条件40℃下不同酶之间测出来的活力有可比性吗？
比如两种蛋白酶的活力都是20万，那如果取相同单位的酶同一条件下水解蛋白，结果会一样吗？
我觉得国标测定酶活的方法，只适合同一种酶的测定，不一样的酶是没有可比性的。
所以，诺维信等厂家才会用自己测定酶活的方法和不同酶活单位来标注不同的酶，对不对？

那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果，按照统一的酶活力单位来添加的话，是不是根本没有意义？
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研究僧
1楼2012-04-25 09:25:32
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biolio2009

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做酶解  主要看的是水解后的结果 ，更本不用在意 厂家产品酶活力标注
这个只是一个参考。
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2楼2012-04-25 10:54:31
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧
引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2012-04-25 10:54:31:
你做酶解  主要看的是水解后的结果 ，更本不用在意 厂家产品酶活力标注
这个只是一个参考。

那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果，按照统一的酶活力单位来添加的话，是不是根本没有意义？
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研究僧
3楼2012-04-25 11:10:04
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
活性测定是有前提条件的（指定底物\pH\温度\缓冲体系），你使用的条件可能不完全一样，可以按照说明书给的活性前后做个梯度。
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4楼2012-04-25 19:50:41
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zhangyt7638

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实，酶活检测仅仅是对酶活大小的初步判定，主要还是要看其对应用底物（不一定是酪蛋白）的酶解效果，通过酶解产物的监测比酶活检测更准确，当然还要摸索适合的酶解条件了；如果两种蛋白酶的活力都是20万，那如果取相同单位的酶同一条件下水解蛋白，结果可能不一样，每种酶都有它的最适底物和条件；那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果，按照统一的酶活力单位来添加的话，不一定没有意义，它只是作为一个初筛的标准，而且要根据你用的几种蛋白酶的最适条件（酸、中、碱性）去酶解，去监测产物，再去考虑酶加量、底物量、酶解时间、温度和pH。
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5楼2012-04-26 13:12:01
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧
★ ★
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-27 13:11:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangyt7638 at 2012-04-26 13:12:01:
其实，酶活检测仅仅是对酶活大小的初步判定，主要还是要看其对应用底物（不一定是酪蛋白）的酶解效果，通过酶解产物的监测比酶活检测更准确，当然还要摸索适合的酶解条件了；如果两种蛋白酶的活力都是20万，那如果 ...

没有看懂什么意思，逻辑有点小乱，能否再解释一下？
我现在就是要比较三种酶的酶解效果，活力没有测定。酶标注的酶活单位也不一样。
酶活需不需要测？酶活力用国家标准来测？测出来的结果也不能真实的反应对同一种底物最大水解能力，有什么意义？
你说该怎么设计试验就能够准确的反应我要的结果？
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研究僧
6楼2012-04-26 20:01:56
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zhangyt7638

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-27 13:11:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by alqfren at 2012-04-26 20:01:56:
没有看懂什么意思，逻辑有点小乱，能否再解释一下？
我现在就是要比较三种酶的酶解效果，活力没有测定。酶标注的酶活单位也不一样。
酶活需不需要测？酶活力用国家标准来测？测出来的结果也不能真实的反应对 ...

不清楚楼主用三种酶去酶解什么底物或是仅仅检测酶活，
酶活需要用国标测，比如你去酶解血红蛋白，每克血红蛋白水解需要m单位的酶活，根据你测得酶活去换算用酶量，在每种酶的最适条件（温度、pH等，可以向厂家要的）下去酶解，去监测小肽含量，根据小肽含量的高低初步判定哪种酶的酶解效果好，再去优化那种酶的条件，如果你不嫌麻烦的话，每种酶都可以多设置几个梯度，去优化，看酶解效果
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7楼2012-04-27 11:06:37
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flyy1986

铜虫 (小有名气)
★
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什么是酶解效果？有定义么？
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8楼2012-04-28 09:00:41
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meiting

木虫 (正式写手)

新手上路
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
比较几种蛋白酶的活力，没必要一定用国标，自己制定一个比较适合你实验方法的酶活力标准就行了，这样操作更为简单。
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目前的我们谁也改变不了，能做的只是充实自己，改变自己……
9楼2012-05-12 13:01:43
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sunnymen

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
9楼: Originally posted by meiting at 2012-05-12 13:01:43
比较几种蛋白酶的活力，没必要一定用国标，自己制定一个比较适合你实验方法的酶活力标准就行了，这样操作更为简单。

请问你自定的方法是什么？
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10楼2012-09-12 17:20:36
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