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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

[交流] 不同类别的蛋白酶的活力测定 已有8人参与

根据GB23527-2009蛋白酶制剂方法,测定方法中蛋白酶缓冲液分为三种磷酸、乳酸、硼酸,pH分别为7.5、10.5、3.0,分别用于稀释中性、碱性、酸性蛋白酶。
问题是,如果这几个pH都不是酶活的最适pH,同一温度条件40℃下不同酶之间测出来的活力有可比性吗?
比如两种蛋白酶的活力都是20万,那如果取相同单位的酶同一条件下水解蛋白,结果会一样吗?
我觉得国标测定酶活的方法,只适合同一种酶的测定,不一样的酶是没有可比性的。
所以,诺维信等厂家才会用自己测定酶活的方法和不同酶活单位来标注不同的酶,对不对?

那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果,按照统一的酶活力单位来添加的话,是不是根本没有意义?
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研究僧
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zhangyt7638

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
其实,酶活检测仅仅是对酶活大小的初步判定,主要还是要看其对应用底物(不一定是酪蛋白)的酶解效果,通过酶解产物的监测比酶活检测更准确,当然还要摸索适合的酶解条件了;如果两种蛋白酶的活力都是20万,那如果取相同单位的酶同一条件下水解蛋白,结果可能不一样,每种酶都有它的最适底物和条件;那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果,按照统一的酶活力单位来添加的话,不一定没有意义,它只是作为一个初筛的标准,而且要根据你用的几种蛋白酶的最适条件(酸、中、碱性)去酶解,去监测产物,再去考虑酶加量、底物量、酶解时间、温度和pH。
5楼2012-04-26 13:12:01
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biolio2009

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你做酶解  主要看的是水解后的结果 ,更本不用在意 厂家产品酶活力标注
这个只是一个参考。
2楼2012-04-25 10:54:31
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2012-04-25 10:54:31:
你做酶解  主要看的是水解后的结果 ,更本不用在意 厂家产品酶活力标注
这个只是一个参考。

那我现在比较几种蛋白酶的酶解效果,按照统一的酶活力单位来添加的话,是不是根本没有意义?
研究僧
3楼2012-04-25 11:10:04
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
活性测定是有前提条件的(指定底物\pH\温度\缓冲体系),你使用的条件可能不完全一样,可以按照说明书给的活性前后做个梯度。
关注我关注的
4楼2012-04-25 19:50:41
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