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折磨了一个月的测序-重叠峰问题！
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我最近的实验是根据别人文献报道的引物，P四株细菌中可能存在的一个基因。经过摸索退火温度，我已经可以P出单一条带，然后我就把PCR产物直接拿去测序，均显示重叠峰严重，结果为杂合，比对的基因相似也很低。然后我又做了一次重复，条带很单一，很亮，又直接拿去测序，结果相同。 所以这周我选择克隆测序，回收片段，连接载体进行转化，挑阳性克隆培养，在将菌液拿去测序前，我也用引物进行了阳性克隆鉴定，结果条带仍旧很单一。 但是今天的测序结果出来后显示，所有结果均为非单一克隆，其测序的套峰仍旧很严重！ 现在我很迷茫，不知道这是为什么，心情也很沮丧，还请大家多多帮助！ |
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