24小时热门版块排行榜    

查看: 2478  |  回复: 18
【悬赏金币】回答本帖问题,作者nothaao将赠送您 20 个金币

nothaao

铜虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白质

今天做了标准曲线,空白值得吸光度偏高,达到1.356,100mg/L的,加乙醇和酒精配的,配考马斯亮蓝的时候感觉颜色就比较深,是深蓝色,正常吗?线性一般,两个9,我就是觉得吸光度太高了,去掉空白的吸光度正常,怎么回事呢,
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

我的地盘你做主

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-15 12:02:04
具体过程是这样做的,我写出来吧,方便大家给我找毛病,是用分光光度计在595nm处测得,用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL  85%磷酸,我看我的磷酸是优级纯,没写百分含量,应该是 ...

用玻璃比色皿把,考马斯亮蓝会与石英反应的
想你没话说
16楼2013-08-21 18:02:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测蛋白浓度为何要这样麻烦,用BCA法不是挺好的吗,准确性也挺好的。
成功,就是成为你想成为的人
7楼2013-08-16 10:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:23
测定的时候不要用石英比色皿,容易吸附染料,造成实验误差,改用玻璃比色皿
15楼2013-08-21 14:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有个试剂盒貌似对蛋白质定量很准确,用考马斯误差还是很大的
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
17楼2013-08-26 10:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)

具体过程是这样做的,我写出来吧,方便大家给我找毛病,是用分光光度计在595nm处测得,用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL  85%磷酸,我看我的磷酸是优级纯,没写百分含量,应该是100%吧,所以我加了85mL,定容到1L
颜色比较深,所以空白高,
取0.01G牛血清蛋白,溶解后定容到100mL
标曲加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL标准溶液,补充水位1mL,加入考马斯亮蓝5mL,混合,放置5MIN,在595NM测吸光度,我的吸光值分别为1.356,1.446,1.502,1.613,1.728,1.743
我是不是应该少加些考马斯亮蓝了,多加些标准溶液?各位大侠指导下撒
2楼2013-08-15 12:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-15 16:55:13
感觉你的蛋白的标准浓度大了,那么点考马斯亮蓝早就饱和了,你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2013-08-15 14:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-15 14:42:58
感觉你的蛋白的标准浓度大了,那么点考马斯亮蓝早就饱和了,你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···

再问下,那我的空白非常高是为什么那
4楼2013-08-15 15:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:33
用空白矫零的啊,怎么会空白的很高呢?空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计?一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好,这个是设计的精确度要求···
会当凌绝顶,一览众山小
5楼2013-08-16 08:55:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-16 08:55:11
用空白矫零的啊,怎么会空白的很高呢?空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计?一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好,这个是设计的精确度要求···

用水调零。这样能看空白是多少
6楼2013-08-16 09:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

我勒个去啊···
会当凌绝顶,一览众山小
8楼2013-08-16 16:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

你用水调零,看空白是什么意思,没明白;你的空白加的蛋白浓度是零啊,这个的吸光值就是个背景色啊,你要看他是多少干嘛?
会当凌绝顶,一览众山小
9楼2013-08-16 17:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接买个试剂盒得啦,自己配确实麻烦,误差也大。再说考马斯亮蓝测蛋白本身误差都很大
10楼2013-08-16 17:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nothaao 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 初始合伙人来啦!(生物试剂耗材标准品) +11 欢快的小科研人 2024-06-15 21/1050 2024-06-17 18:47 by 欢快的小科研人
[高分子] 寻找聚酯反应釜 +3 茕茕恭煮 2024-06-15 4/200 2024-06-17 18:18 by sunliyan123
[考博] 2025考博 +7 自强不息a?a 2024-06-15 11/550 2024-06-17 18:13 by 小木雄子
[基金申请] 我标书代码变了 +44 学员NHuqdk 2024-06-16 58/2900 2024-06-17 17:39 by wenfengw83
[基金申请] 面青地会评时间 +8 tanjydd 2024-06-15 8/400 2024-06-17 17:08 by 小龙虾2008
[硕博家园] 硕博巨婴,也许才刚刚开始 +32 SNaiL1995 2024-06-12 84/4200 2024-06-17 16:04 by 20171214
[论文投稿] 审稿问题:为什么荧光激发波长和紫外吸收波长差的大? 10+5 sdawege 2024-06-14 9/450 2024-06-17 13:15 by 人族首领
[论文投稿] 审稿人含糊拒稿,还需要回复吗?如何回复? 20+3 BruceChum 2024-06-15 19/950 2024-06-17 12:03 by 投必得科研顾问
[找工作] 江西双非一本和四川双一流高校如何选择? 5+8 寒山敲钟 2024-06-12 25/1250 2024-06-16 22:05 by zhaojiang427
[基金申请] 希望今年自己国自然面上项目和老婆青年项目能中! +7 恐龙爸爸 2024-06-14 7/350 2024-06-16 14:48 by redfish105
[基金申请] 博后基金,博管会会提前知道消息吗? +4 yuyiang 2024-06-13 4/200 2024-06-16 11:40 by yangyuzhong4
[论文投稿] 求机械类四区sci推荐 5+3 迷茫小旷 2024-06-14 4/200 2024-06-15 11:25 by bobvan
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI,审稿人一个拒稿,一个小修,编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[基金申请] E12面上申请 +4 汉风之遗 2024-06-13 4/200 2024-06-14 15:28 by 天外飞去来
[考博] 申博找导师 +4 疏影横斜水清浅3 2024-06-13 6/300 2024-06-14 14:31 by zxl_1105
[基金申请] 国自然基金公布的时候基金号有吗 +8 潇洒怡惜 2024-06-13 11/550 2024-06-14 11:24 by JRfei
[硕博家园] 机械研究生如何拿到年薪40+w +13 阿巴阿巴哦哦 2024-06-11 15/750 2024-06-13 15:40 by 113745685
[考博] 博导选择 +3 bing85977 2024-06-12 3/150 2024-06-13 15:34 by 我是邱尧
[有机交流] 原料反应完了,怎么知道是产物还是中间体 +6 小胡在努力 2024-06-11 8/400 2024-06-13 13:33 by 091602
[硕博家园] 考博应该从哪里开始准备 +6 亮姐2019 2024-06-11 8/400 2024-06-13 12:53 by 帕秋莉GO
信息提示
请填处理意见