应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 考马斯亮蓝法测蛋白质
191/2返回列表12下一页
查看: 3553  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nothaao

铜虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白质

今天做了标准曲线，空白值得吸光度偏高，达到1.356，100mg/L的，加乙醇和酒精配的，配考马斯亮蓝的时候感觉颜色就比较深，是深蓝色，正常吗？线性一般，两个9，我就是觉得吸光度太高了，去掉空白的吸光度正常，怎么回事呢，
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

我的地盘你做主

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-15 11:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-15 12:02:04
具体过程是这样做的，我写出来吧，方便大家给我找毛病，是用分光光度计在595nm处测得，用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL  85%磷酸，我看我的磷酸是优级纯，没写百分含量，应该是 ...

用玻璃比色皿把，考马斯亮蓝会与石英反应的
赞一下(2人) 回复此楼
想你没话说
16楼2013-08-21 18:02:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测蛋白浓度为何要这样麻烦，用BCA法不是挺好的吗，准确性也挺好的。
赞一下(1人) 回复此楼
成功，就是成为你想成为的人
7楼2013-08-16 10:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:23
测定的时候不要用石英比色皿，容易吸附染料，造成实验误差，改用玻璃比色皿
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2013-08-21 14:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有个试剂盒貌似对蛋白质定量很准确，用考马斯误差还是很大的
赞一下(1人) 回复此楼
事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
17楼2013-08-26 10:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)
具体过程是这样做的，我写出来吧，方便大家给我找毛病，是用分光光度计在595nm处测得，用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL  85%磷酸，我看我的磷酸是优级纯，没写百分含量，应该是100%吧，所以我加了85mL，定容到1L
颜色比较深，所以空白高，
取0.01G牛血清蛋白，溶解后定容到100mL
标曲加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL标准溶液，补充水位1mL，加入考马斯亮蓝5mL，混合，放置5MIN，在595NM测吸光度，我的吸光值分别为1.356,1.446,1.502,1.613,1.728,1.743
我是不是应该少加些考马斯亮蓝了，多加些标准溶液？各位大侠指导下撒
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-15 12:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-15 16:55:13
感觉你的蛋白的标准浓度大了，那么点考马斯亮蓝早就饱和了，你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
3楼2013-08-15 14:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-15 14:42:58
感觉你的蛋白的标准浓度大了，那么点考马斯亮蓝早就饱和了，你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···

再问下，那我的空白非常高是为什么那
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-15 15:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:33
用空白矫零的啊，怎么会空白的很高呢？空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计？一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好，这个是设计的精确度要求···
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
5楼2013-08-16 08:55:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-16 08:55:11
用空白矫零的啊，怎么会空白的很高呢？空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计？一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好，这个是设计的精确度要求···

用水调零。这样能看空白是多少
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-16 09:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

我勒个去啊···
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
8楼2013-08-16 16:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

你用水调零，看空白是什么意思，没明白；你的空白加的蛋白浓度是零啊，这个的吸光值就是个背景色啊，你要看他是多少干嘛？
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
9楼2013-08-16 17:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接买个试剂盒得啦，自己配确实麻烦，误差也大。再说考马斯亮蓝测蛋白本身误差都很大
赞一下 回复此楼
10楼2013-08-16 17:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nothaao 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 18:52 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:56 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭