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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 考马斯亮蓝法测蛋白质
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shangxin6666

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1）市售磷酸浓度是85%，配的时候直接加100mL。
2）空白样直接用水就行，不用加染色液。
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11楼2013-08-16 17:44:07
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:43
空白的值应该为零才对的，因为里面没有蛋白的嘛。我当时做的标曲0.9997，方法和你的一样，只是蛋白标液我稀释了（依据样品吸光度而定的），还有我用的玻璃比色皿，对了，经验之谈，考马斯每次加样之前都要充分摇匀，加完样后每个试管都要同一方向同一力度振荡十次左右，放置十五分钟，每个样测之前都要摇匀后再测。祝你好运，每次加样都要小心，尤其是蛋白标样哟，加油
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12楼2013-08-16 22:34:09
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nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-16 17:02:21
你用水调零，看空白是什么意思，没明白；你的空白加的蛋白浓度是零啊，这个的吸光值就是个背景色啊，你要看他是多少干嘛？...

看背景值的吸光度啊~以前测氨氮，要看空白值的吸光度，如果吸光度偏高，说明纳氏试剂配的不合格，我想这个是一样的道理吧
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13楼2013-08-20 10:32:25
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nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sunnymen at 2013-08-16 17:03:14
直接买个试剂盒得啦，自己配确实麻烦，误差也大。再说考马斯亮蓝测蛋白本身误差都很大

哎，是的哇~结果是有的，不知道可信度多少
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14楼2013-08-20 10:33:00
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:23
测定的时候不要用石英比色皿，容易吸附染料，造成实验误差，改用玻璃比色皿
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15楼2013-08-21 14:24:48
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-15 12:02:04
具体过程是这样做的，我写出来吧，方便大家给我找毛病，是用分光光度计在595nm处测得，用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL  85%磷酸，我看我的磷酸是优级纯，没写百分含量，应该是 ...

用玻璃比色皿把，考马斯亮蓝会与石英反应的
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想你没话说
16楼2013-08-21 18:02:25
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有个试剂盒貌似对蛋白质定量很准确，用考马斯误差还是很大的
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
17楼2013-08-26 10:20:41
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

最近你测蛋白浓度测的怎么样啊?我最近也在测，求交流
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
18楼2013-08-29 20:12:21
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:49
加标准液要用移液管，一般的移液枪不是很精确，每管的总体积要完全一样。
考马斯试剂自己配的应该不比买来的差多少，达到999还是很容易的。
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19楼2013-11-23 14:08:18
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