24小时热门版块排行榜    

查看: 3401  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白质

今天做了标准曲线,空白值得吸光度偏高,达到1.356,100mg/L的,加乙醇和酒精配的,配考马斯亮蓝的时候感觉颜色就比较深,是深蓝色,正常吗?线性一般,两个9,我就是觉得吸光度太高了,去掉空白的吸光度正常,怎么回事呢,
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:43
空白的值应该为零才对的,因为里面没有蛋白的嘛。我当时做的标曲0.9997,方法和你的一样,只是蛋白标液我稀释了(依据样品吸光度而定的),还有我用的玻璃比色皿,对了,经验之谈,考马斯每次加样之前都要充分摇匀,加完样后每个试管都要同一方向同一力度振荡十次左右,放置十五分钟,每个样测之前都要摇匀后再测。祝你好运,每次加样都要小心,尤其是蛋白标样哟,加油
12楼2013-08-16 22:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

nothaao

铜虫 (小有名气)

具体过程是这样做的,我写出来吧,方便大家给我找毛病,是用分光光度计在595nm处测得,用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL  85%磷酸,我看我的磷酸是优级纯,没写百分含量,应该是100%吧,所以我加了85mL,定容到1L
颜色比较深,所以空白高,
取0.01G牛血清蛋白,溶解后定容到100mL
标曲加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL标准溶液,补充水位1mL,加入考马斯亮蓝5mL,混合,放置5MIN,在595NM测吸光度,我的吸光值分别为1.356,1.446,1.502,1.613,1.728,1.743
我是不是应该少加些考马斯亮蓝了,多加些标准溶液?各位大侠指导下撒
2楼2013-08-15 12:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-15 16:55:13
感觉你的蛋白的标准浓度大了,那么点考马斯亮蓝早就饱和了,你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2013-08-15 14:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-15 14:42:58
感觉你的蛋白的标准浓度大了,那么点考马斯亮蓝早就饱和了,你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···

再问下,那我的空白非常高是为什么那
4楼2013-08-15 15:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见