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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 考马斯亮蓝法测蛋白质
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nothaao

铜虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白质

今天做了标准曲线，空白值得吸光度偏高，达到1.356，100mg/L的，加乙醇和酒精配的，配考马斯亮蓝的时候感觉颜色就比较深，是深蓝色，正常吗？线性一般，两个9，我就是觉得吸光度太高了，去掉空白的吸光度正常，怎么回事呢，
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1楼 2013-08-15 11:52:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-15 12:02:04
具体过程是这样做的，我写出来吧，方便大家给我找毛病，是用分光光度计在595nm处测得，用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL  85%磷酸，我看我的磷酸是优级纯，没写百分含量，应该是 ...

用玻璃比色皿把，考马斯亮蓝会与石英反应的
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想你没话说
16楼2013-08-21 18:02:25
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测蛋白浓度为何要这样麻烦，用BCA法不是挺好的吗，准确性也挺好的。
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成功，就是成为你想成为的人
7楼2013-08-16 10:03:10
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:23
测定的时候不要用石英比色皿，容易吸附染料，造成实验误差，改用玻璃比色皿
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15楼2013-08-21 14:24:48
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有个试剂盒貌似对蛋白质定量很准确，用考马斯误差还是很大的
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
17楼2013-08-26 10:20:41
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普通回帖

nothaao

铜虫 (小有名气)
具体过程是这样做的，我写出来吧，方便大家给我找毛病，是用分光光度计在595nm处测得，用的石英比色皿
取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL  85%磷酸，我看我的磷酸是优级纯，没写百分含量，应该是100%吧，所以我加了85mL，定容到1L
颜色比较深，所以空白高，
取0.01G牛血清蛋白，溶解后定容到100mL
标曲加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL标准溶液，补充水位1mL，加入考马斯亮蓝5mL，混合，放置5MIN，在595NM测吸光度，我的吸光值分别为1.356,1.446,1.502,1.613,1.728,1.743
我是不是应该少加些考马斯亮蓝了，多加些标准溶液？各位大侠指导下撒
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2楼2013-08-15 12:02:04
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lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-15 16:55:13
感觉你的蛋白的标准浓度大了，那么点考马斯亮蓝早就饱和了，你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2013-08-15 14:42:58
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nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-15 14:42:58
感觉你的蛋白的标准浓度大了，那么点考马斯亮蓝早就饱和了，你可以把蛋白浓度稀释一个梯度看看···

再问下，那我的空白非常高是为什么那
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4楼2013-08-15 15:00:32
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lovezxl3606

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-23 14:24:33
用空白矫零的啊，怎么会空白的很高呢？空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计？一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好，这个是设计的精确度要求···
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2013-08-16 08:55:11
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nothaao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lovezxl3606 at 2013-08-16 08:55:11
用空白矫零的啊，怎么会空白的很高呢？空白的应该是0啊···你是用的什么分光光度计？一般的这类仪器读数要维持在0.2--0.8之间最好，这个是设计的精确度要求···

用水调零。这样能看空白是多少
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6楼2013-08-16 09:49:55
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lovezxl3606

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

我勒个去啊···
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会当凌绝顶，一览众山小
8楼2013-08-16 16:57:48
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lovezxl3606

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nothaao at 2013-08-16 09:49:55
用水调零。这样能看空白是多少...

你用水调零，看空白是什么意思，没明白；你的空白加的蛋白浓度是零啊，这个的吸光值就是个背景色啊，你要看他是多少干嘛？
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会当凌绝顶，一览众山小
9楼2013-08-16 17:02:21
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接买个试剂盒得啦，自己配确实麻烦，误差也大。再说考马斯亮蓝测蛋白本身误差都很大
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10楼2013-08-16 17:03:14
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