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329939815木虫 (正式写手)
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求助：关于考马斯亮蓝法测定蛋白质
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本人最近测牛血清蛋白（1mg/ml），100微升（加入3ml考马斯亮蓝）的吸光度只有0.332。 相关系数0.9866，奔溃！ 第一次做这个东西，迷茫了，不知道出了什么问题！ 有没有在武汉的学校用这种方法测蛋白的虫友呀？求认识...求教！急，谢谢！！！！！ 本人在武汉...继续请教，谢谢！ |
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10楼2012-04-20 09:26:10
nakice
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12楼2012-04-20 10:45:47
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R250一般用于SDS-PAGE胶的染色，G250一般用于初步检测是否有蛋白 R250(Coomassie brilliant blue R250).C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意这点. G250, 又名Xylene brilliant cyaninG.比考马斯亮蓝R250多二个甲基.MW=854;λmax=590―610nm.染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色.所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析. G250中的G就是Green，偏绿，R250中的R代表Red，偏红，在进行小分子量蛋白的Tricine电泳是常用G250染色，至于加热，染和脱色都可以加热，但都是在急需知道结果的情况下采用，加热后染的背景色很重脱色时间就长而且很难将背景色脱干净，脱色液经常加热会导致固定剂的会发，很快脱色剂就没用了，脱色效果很差，而且加热挥发出来的甲醛对呼吸道有刺激作用因此尽量不要加热！ G250配完是棕红的，遇蛋白才会变蓝 |
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32993981513楼2012-04-20 11:15:30
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