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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于考马斯亮蓝法测定蛋白质
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329939815

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by telomerase at 2012-04-20 09:26:10:
考蓝配的颜色对吗？棕红色的
如果都没问题，那就是操作时小心点，别引进其他蛋白的污染，

我配的是蓝色的是R250
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11楼2012-04-20 10:35:48
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
329939815: 金币+3, ★有帮助 2012-06-24 23:48:58
329939815: 金币+2 2012-06-24 23:50:19
考马斯染液不是G-250吗？R-250我们是用来进行电泳染色的呀 而且是需要过滤的 考马斯不容易溶解并且容易有杂质在里面，
另外你的标准蛋白加入后混匀了吗？测吸光值的时候比色皿洗干净了吗？
我们在做标曲的时候用96孔板酶标仪比色做出来的标曲相关系数能达到三个九 你要有条件用酶标仪比色会更好的~
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亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
12楼2012-04-20 10:45:47
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
R250一般用于SDS-PAGE胶的染色，G250一般用于初步检测是否有蛋白
R250(Coomassie brilliant blue R250).C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意这点.
G250, 又名Xylene brilliant cyaninG.比考马斯亮蓝R250多二个甲基.MW=854;λmax=590―610nm.染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色.所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析.
G250中的G就是Green，偏绿，R250中的R代表Red，偏红，在进行小分子量蛋白的Tricine电泳是常用G250染色，至于加热，染和脱色都可以加热，但都是在急需知道结果的情况下采用，加热后染的背景色很重脱色时间就长而且很难将背景色脱干净，脱色液经常加热会导致固定剂的会发，很快脱色剂就没用了，脱色效果很差，而且加热挥发出来的甲醛对呼吸道有刺激作用因此尽量不要加热！


G250配完是棕红的，遇蛋白才会变蓝
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329939815
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
13楼2012-04-20 11:15:30
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329939815

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by telomerase at 2012-04-20 11:15:30:
R250一般用于SDS-PAGE胶的染色，G250一般用于初步检测是否有蛋白
R250(Coomassie brilliant blue R250).C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋 ...

用R250可以测吗？
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14楼2012-04-20 12:51:51
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wc4646

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
329939815: 金币+3, ★有帮助 2012-06-24 23:49:13
329939815: 金币+2 2012-06-24 23:50:07
1. 考马斯亮蓝工作液需要过滤，配制时选用超纯水配制。配制后不可放置时间过长。
2. 牛血清蛋白精确定量，可以将其测定体积扩大至0.5ml+0.5ml超纯水+2ml考马斯亮蓝工作液。
3. 确定测定仪器及条件无误。595nm处测定，仪器参数常规设置。
4. 实验至少3次重复，求其平均值进行计算分析。
祝好！
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15楼2012-04-20 13:01:37
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wc4646

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

另外，测定蛋白含量一般用的都是考马斯亮蓝G-250，没听说用R-250的
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16楼2012-04-20 13:03:38
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
好像不大好吧，没有用R的测过
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
17楼2012-04-20 14:22:49
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xll8380

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

做标准曲线，相关系数是0.9866，只要P值<0.01显著不就ok吗
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18楼2012-06-02 16:33:40
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Alisa_lin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白定量吗？可以用试剂盒啊。
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19楼2012-06-02 20:49:32
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pkonly

木虫 (正式写手)
同在武汉的，可以交流下！前面各位大侠说的基本上已经完全了，但是具体操作还是细心才好，还有去污剂的存在对结果影响也很大的。
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20楼2012-06-09 00:18:02
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