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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用考马斯亮蓝法测定蛋白时，浓度出现负值是什么原因？？急求助
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duoduozuo

新虫 (小有名气)

[求助] 用考马斯亮蓝法测定蛋白时，浓度出现负值是什么原因？？急求助

用考马斯亮蓝测定蛋白浓度时，浓度出现负值，急求各位大牛指点一下!我的空白样没问题，我在加考马斯亮蓝到样品中时，发现滴少量考马斯亮蓝到样品中时，溶液出现蓝色，但是接着加至5ml时，溶液的蓝色消失了，取而代之的是一种棕色。测定时，浓度是负值，但是吸光值是正的。想问各位，这是什么原因，是不是我的蛋白浓度太低了？有没有什么解决的办法啊！由于实验等不了，你懂的！所以急求各位指点迷津！！！！！！
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天道酬勤
1楼 2013-07-09 10:16:30
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-07-09 18:45:58
duoduozuo: 金币+10, ★有帮助 2013-07-12 08:41:23
吸光值是正的，浓度是负的话，应该和你做的标准曲线有关系，建议重新做下标准曲线，R值最起码得有两个9吧。还有就是，你的蛋白浓度肯定比较低，所以你可以把标准品做个浓度比较低的曲线。
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一步一步！
2楼2013-07-09 10:48:23
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leechau2007

木虫 (初入文坛)
个人建议换用lorry法，也就是福林酚法，测蛋白质，考马斯亮蓝误差太大，本人使用lorry法测蛋白R的平方可以做到3个9。
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3楼2013-07-09 10:57:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能样品中有些成分干扰蓝色形成。你是否做了溶解样品的缓冲液的对照？
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4楼2013-07-09 12:06:13
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测得浓度值不在标准曲线内，空白组一定要做好，仪器事项要校准调零，该法检测限度是1mg
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为自己而开始
5楼2013-07-09 13:25:57
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电电的开始

银虫 (小有名气)
加考马斯后5分钟到20分钟内测定
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为自己而开始
6楼2013-07-09 13:28:46
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duoduozuo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yakir at 2013-07-09 10:48:23
吸光值是正的，浓度是负的话，应该和你做的标准曲线有关系，建议重新做下标准曲线，R值最起码得有两个9吧。还有就是，你的蛋白浓度肯定比较低，所以你可以把标准品做个浓度比较低的曲线。

我试试看，谢谢啦
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天道酬勤
7楼2013-07-12 08:41:47
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duoduozuo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 电电的开始 at 2013-07-09 13:28:46
加考马斯后5分钟到20分钟内测定

是在这个时间范围测定的
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天道酬勤
8楼2013-07-12 08:42:46
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欧阳-90

银虫 (小有名气)
楼主你的问题是怎么解决的呢？最近我在做烟草叶中蛋白质含量测定，测力几次都是吸光度为负值，但是配置的BSA标准曲线吸光度都没有问题。
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9楼2015-10-27 20:44:49
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15202284661

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗？我的问题和你一样一样的，出现了棕色，然后OD值比空白还要小。
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10楼2016-03-30 10:45:00
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