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duoduozuo

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[求助] 用考马斯亮蓝法测定菌液中细菌总蛋白浓度，需要对菌液进行怎样的预处理

用考马斯亮蓝法测定菌液中细菌总蛋白浓度，需要对细菌细菌进行怎样的预处理才能去测定？需要先将细菌从培养基中离心出来再置于缓冲液中再用超声波破碎么？还是新手，希望各位大牛指导。先谢啦！

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天道酬勤

1楼 2013-02-26 20:20:19

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lpl0032

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专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 手机回帖，给力 2013-02-28 23:48:54

对的！离心收集菌体，冰浴破碎一般一个小时，超高速离心，取上清液

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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2楼2013-02-26 22:10:18

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laozuzunzhe

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-28 23:49:03

我们超声破碎大概5min，这个条件需要自己摸索，感觉一小时可能太长了。
先离心分理处菌，再用缓冲液清洗一次；
在缓冲液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。

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3楼2013-02-27 09:40:06

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duoduozuo

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by lpl0032 at 2013-02-26 22:10:18
对的！离心收集菌体，冰浴破碎一般一个小时，超高速离心，取上清液

谢谢啦！

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天道酬勤

4楼2013-02-27 09:46:02

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duoduozuo

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引用回帖:

3楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2013-02-27 09:40:06
我们超声破碎大概5min，这个条件需要自己摸索，感觉一小时可能太长了。
先离心分理处菌，再用缓冲液清洗一次；
在缓冲液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。

需要的是细菌的总蛋白，那也需要将沉淀当中的蛋白算在内吧？怎么样进行后续处理才能去测定呢？刚开始接触这个，什么都还不懂，希望您能不吝赐教。谢谢了

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天道酬勤

5楼2013-02-27 09:49:49

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laozuzunzhe

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【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-28 23:49:10

引用回帖:

5楼: Originally posted by duoduozuo at 2013-02-27 09:49:49
需要的是细菌的总蛋白，那也需要将沉淀当中的蛋白算在内吧？怎么样进行后续处理才能去测定呢？刚开始接触这个，什么都还不懂，希望您能不吝赐教。谢谢了

...

你可以查阅一下相关的文献，查关键词为细菌、总蛋白等文献，应该会对你有帮助，能测出的蛋白总量一般都只是接近真实蛋白总量，如果你不是研究这个测定方法，那就看看文献选一个合适的方法就行了，我因为只测水溶性的，所以也不是很了解总蛋白的测定方法。希望对你有所帮助！

[ Last edited by laozuzunzhe on 2013-2-27 at 13:37 ]

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duoduozuo

6楼2013-02-27 13:34:40

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zhuqp

铁虫 (初入文坛)

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专业: 临床免疫学检验

需要破碎。

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7楼2013-02-27 14:26:24

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duoduozuo

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送鲜花一朵

引用回帖:

6楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2013-02-27 13:34:40
你可以查阅一下相关的文献，查关键词为细菌、总蛋白等文献，应该会对你有帮助，能测出的蛋白总量一般都只是接近真实蛋白总量，如果你不是研究这个测定方法，那就看看文献选一个合适的方法就行了，我因为只测水 ...

非常感谢

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天道酬勤

8楼2013-02-27 15:28:07

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淡然之2011

新虫 (初入文坛)

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楼主，请教一下，如何测定细菌中的蛋白质含量？考马斯亮蓝法的具体步骤是怎么样操作的呀，可以帮帮我吗...

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学生物的孩子伤不起

9楼2014-03-06 21:55:01

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