[交流] 采用考马斯亮蓝法测蛋白酶活已有7人参与

1楼2013-04-12 00:10:42

shiliu2011

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此法是用来定量蛋白啊！单位当然是ug/ul or mg/ml之类了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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2楼2013-04-12 02:28:30

mada1986

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你的蛋白酶也是蛋白啊这个怎么测？

3楼2013-04-12 10:48:37

lishuelishue

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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-04-12 23:22:26

你只能定量蛋白有多少啊，怎么能测定出酶活？就算是酶也是蛋白，但是你测出的也是酶量啊，不是酶活。、。。

4楼2013-04-12 21:39:25

windmaple

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如果你确定是用来测酶活（考马斯为该酶特异性底物），可以考虑用下面的公式套一下：
　　　酶活力（U/L）=n×△A×10^6×V总/=m×t×V酶
　　　式中：n为酶液稀释倍数
　　　　　　V总为反应总体积
　　　　　　V酶为反应酶液体积
　　　　　　△A为反应液在t内吸光值的变化值
　　　　　　t为反应时间（min）
　　　　　　m为考马斯氧化态的摩尔吸光系数（cm-1mol-1L）

[ Last edited by windmaple on 2013-4-14 at 09:14 ]

5楼2013-04-14 09:04:36

chengjg

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这个蛋白酶酶活好像是采用福林酚法测定呢吧,用干酪素做底物.

6楼2013-04-15 08:11:46

断翼的天使

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引用回帖:

6楼: Originally posted by chengjg at 2013-04-15 08:11:46
这个蛋白酶酶活好像是采用福林酚法测定呢吧,用干酪素做底物.

这个是可以，但这种方法耗费时间比较长，我要测得又比较多，因此想看看有没有其他办法？

7楼2013-04-16 16:40:57

断翼的天使

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引用回帖:

5楼: Originally posted by windmaple at 2013-04-14 09:04:36
如果你确定是用来测酶活（考马斯为该酶特异性底物），可以考虑用下面的公式套一下：
　　　酶活力（U/L）=n×△A×10^6×V总/=m×t×V酶
　　　式中：n为酶液稀释倍数
　　　　　　V总为反应总体积
　　　　　　 ...

我测得结果只有最后的吸光度，因此　△A没法求，还有m为考马斯氧化态的摩尔吸光系数（cm-1mol-1L）是怎么算的呢？

8楼2013-04-16 16:43:14

断翼的天使

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引用回帖:

4楼: Originally posted by lishuelishue at 2013-04-12 21:39:25
你只能定量蛋白有多少啊，怎么能测定出酶活？就算是酶也是蛋白，但是你测出的也是酶量啊，不是酶活。、。。

蛋白酶酶活测定方法及原理
Protease activity assay method and principle
方法原理
福林酚法福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色钼蓝和钨蓝混合物，而蛋白质分子中有含酚基的氨基酸如酪氨酸、色氨酸等，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应，利用此原理测定蛋白酶酶活。
考马斯亮蓝法考马斯亮蓝染料与蛋白质在酸性条件下结合，主要是染料与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色，在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
按照这个最后可以得出蛋白含量，但是如何换算成酶活呢？

9楼2013-04-16 16:51:06