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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 采用考马斯亮蓝法测蛋白酶活
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断翼的天使

金虫 (小有名气)

[交流] 采用考马斯亮蓝法测蛋白酶活 已有7人参与

如果采用考马斯亮蓝法测蛋白酶活，测出吸光度后，如何计算酶活呢？
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1楼 2013-04-12 00:10:42
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
此法是用来定量蛋白啊！单位当然是ug/ul  or mg/ml之类了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-04-12 02:28:30
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mada1986

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的蛋白酶也是蛋白啊 这个怎么测？
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3楼2013-04-12 10:48:37
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lishuelishue

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-04-12 23:22:26
你只能定量蛋白有多少啊，怎么能测定出酶活？就算是酶也是蛋白，但是你测出的也是酶量啊，不是酶活。、。。
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4楼2013-04-12 21:39:25
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windmaple

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你确定是用来测酶活（考马斯为该酶特异性底物），可以考虑用下面的公式套一下：
　　　酶活力（U/L）=n×△A×10^6×V总/=m×t×V酶
　　　式中：n为酶液稀释倍数
　　　　　　V总为反应总体积
　　　　　　V酶为反应酶液体积
　　　　　　△A为反应液在t内吸光值的变化值
　　　　　　t为反应时间（min）
　　　　　　m为考马斯氧化态的摩尔吸光系数（cm-1mol-1L）

[ Last edited by windmaple on 2013-4-14 at 09:14 ]
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5楼2013-04-14 09:04:36
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chengjg

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个蛋白酶酶活好像是采用福林酚法测定呢吧,用干酪素做底物.
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6楼2013-04-15 08:11:46
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断翼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chengjg at 2013-04-15 08:11:46
这个蛋白酶酶活好像是采用福林酚法测定呢吧,用干酪素做底物.

这个是可以，但这种方法耗费时间比较长，我要测得又比较多，因此想看看有没有其他办法？
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7楼2013-04-16 16:40:57
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断翼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by windmaple at 2013-04-14 09:04:36
如果你确定是用来测酶活（考马斯为该酶特异性底物），可以考虑用下面的公式套一下：
　　　酶活力（U/L）=n×△A×10^6×V总/=m×t×V酶
　　　式中：n为酶液稀释倍数
　　　　　　V总为反应总体积
　　　　　　 ...

我测得结果只有最后的吸光度，因此　△A没法求，还有m为考马斯氧化态的摩尔吸光系数（cm-1mol-1L）是怎么算的呢？
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8楼2013-04-16 16:43:14
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断翼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lishuelishue at 2013-04-12 21:39:25
你只能定量蛋白有多少啊，怎么能测定出酶活？就算是酶也是蛋白，但是你测出的也是酶量啊，不是酶活。、。。

蛋白酶酶活测定方法及原理
Protease activity assay method and principle
方法        原理
福林酚法        福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色钼蓝和钨蓝混合物，而蛋白质分子中有含酚基的氨基酸如酪氨酸、色氨酸等，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应，利用此原理测定蛋白酶酶活。
考马斯亮蓝法        考马斯亮蓝染料与蛋白质在酸性条件下结合，主要是染料与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色，在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
按照这个最后可以得出蛋白含量，但是如何换算成酶活呢？
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9楼2013-04-16 16:51:06
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断翼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiliu2011 at 2013-04-12 02:28:30
此法是用来定量蛋白啊！单位当然是ug/ul  or mg/ml之类了

是的，就是要定量蛋白酶酶活的含量。
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10楼2013-04-16 16:52:43
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