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shaoxin816银虫 (正式写手)
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[求助]
【求助】藻类protein的测定
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| 本人要测定螺旋藻中protein的含量，打算用SDS-PAGE或者Lowry法~问题来了，测定之前需要那些预处理？刚刚接触~不懂不懂。 |
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【答案】应助回帖
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shaoxin816: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢啦~~ 2012-05-14 19:56:59
shaoxin816: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢啦~~ 2012-05-14 19:56:59
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2 细胞蛋白含量的测定 蛋白质测定采用考马氏亮蓝染色法，以牛血清清蛋白做标准物。 (1) 考马斯亮蓝G-250溶液的配制 准确称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL95％乙醇中，加入85％磷酸100mL，用蒸馏水定容到lL，滤纸过滤后，保存于棕色瓶中。 (2) 蛋白质标准溶液的配制(100 ug／mL) 采用5mg/ml的标准牛血清白蛋白溶液，加蒸馏水溶解并定容，配制成100ug/ml。 (3) 标准曲线的制作 从100 ug/ml的蛋白质标准溶液中分别准确吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于10ml试管中，并加入相应量的蒸馏水至1ml后加入5.0 mL考马斯亮蓝溶液充分混合，放置至少2 min，用l cm光径比色皿在595nm下测得溶液吸光度。以蛋白质浓度(C)为横坐标，以吸光度(A)为纵坐标，得出标准曲线为A=0.0081C+0.0024，R2=0.9978。 (4) 蛋白质含量的测定 准确吸取藻液5 mL，5000 r／min转速下离心10 min后，倒掉上清液，加入同等量0.1M的PBS。超声波破碎仪选择功率30%，Pause On 3 s, Pause Off 1s,冰浴。破碎完全后，5000 r／min转速下离心10min，取1 mL上清液，加入5mL考马斯亮蓝溶液，用1 mLPBS和5mL考马斯亮蓝混合溶液作对照，在595 nm波长下用紫外分光光度计测其吸光度值。根据标准曲线换算蛋白质的含量。 |
4楼2012-05-14 18:35:14
2楼2012-05-11 23:02:50
shaoxin816
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