24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 723  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

doughtiness

新虫 (小有名气)

[求助] 重组酵母不表达

最近在做分泌表达实验,已经成功的将外源基因与真菌表达载体pPICZαA连接,并且成功导入了宿主GS115与X33,但是经过连续三天的甲醇诱导后,经SDS-PAGE验证,却发现蛋白没有表达,最近正为这件事心烦,请问大家有遇到过同样的问题吗?请帮忙指点下,万分感激。我当初选用的酶切位点是Kpnl与Xbal。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doughtiness

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-08-26 20:59:24
1.你是怎么确定转化进宿主菌了呢?PCR?还是测序?一般PCR是不太靠谱的,有可能是假阳性。
2.光SDS-PAGE分析是不够的,一般酵母摇瓶小试的话,蛋白表达量是比较低的,可以考虑用WB进一步确定。
3.发酵条件有没有优 ...

您好,我最近发现蛋白表达了,但是却没有活力。以前目的基因在大肠杆菌中是有活力的,现在为了完成分泌表达的任务,让目的基因在酵母中表达,但是现在的问题是蛋白表达了,条带很浓,但就是没有活力。呜呜呜……不知道该怎么办了
3楼2013-10-20 15:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖应助! 2013-08-26 22:06:01
1.你是怎么确定转化进宿主菌了呢?PCR?还是测序?一般PCR是不太靠谱的,有可能是假阳性。
2.光SDS-PAGE分析是不够的,一般酵母摇瓶小试的话,蛋白表达量是比较低的,可以考虑用WB进一步确定。
3.发酵条件有没有优化,比如pH、甲醇浓度、温度等。
4.你也可以换个载体,比如pPIC9k,pPIC9。
5.线性化酶可以考虑用Sal I。
爱拼才会赢
2楼2013-08-26 20:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +6 徐同学_001 2026-04-04 12/600 2026-04-05 13:14 by 徐同学_001
[考研] 282求调剂 +6 aaa车辆 2026-04-02 10/500 2026-04-05 12:10 by arrow8852
[考研] 求调剂 +3 电气小神童 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:17 by barlinike
[考研] 材料334求调剂 +15 Eecho# 2026-04-03 15/750 2026-04-04 23:05 by 无际的草原
[考研] 302求调剂一志愿华中师范大学 +8 小江小江江江 2026-04-02 8/400 2026-04-04 19:50 by 蓝云思雨
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-04 5/250 2026-04-04 16:45 by cql1109
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 化工调剂303分,过四级 +28 栖梧待风 2026-04-02 28/1400 2026-04-03 21:40 by qlm5820
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 274求调剂 +10 薛定谔的虎。 2026-04-01 10/500 2026-04-03 10:13 by tianyyysss
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +8 贝呗钡钡 2026-03-30 8/400 2026-04-03 09:41 by hypershenger
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 08开头看过来!!! +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 求0861交通运输专硕or材料专硕调剂 +4 勒布朗@ 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:54 by 一只好果子?
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 11408总分309,一志愿东南大学求调剂,不挑专业 +5 天赋带到THU 2026-03-29 6/300 2026-03-30 20:49 by dick_runner
信息提示
请填处理意见