24小时热门版块排行榜    

查看: 767  |  回复: 2

doughtiness

新虫 (小有名气)

[求助] 重组酵母不表达

最近在做分泌表达实验,已经成功的将外源基因与真菌表达载体pPICZαA连接,并且成功导入了宿主GS115与X33,但是经过连续三天的甲醇诱导后,经SDS-PAGE验证,却发现蛋白没有表达,最近正为这件事心烦,请问大家有遇到过同样的问题吗?请帮忙指点下,万分感激。我当初选用的酶切位点是Kpnl与Xbal。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖应助! 2013-08-26 22:06:01
1.你是怎么确定转化进宿主菌了呢?PCR?还是测序?一般PCR是不太靠谱的,有可能是假阳性。
2.光SDS-PAGE分析是不够的,一般酵母摇瓶小试的话,蛋白表达量是比较低的,可以考虑用WB进一步确定。
3.发酵条件有没有优化,比如pH、甲醇浓度、温度等。
4.你也可以换个载体,比如pPIC9k,pPIC9。
5.线性化酶可以考虑用Sal I。
爱拼才会赢
2楼2013-08-26 20:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doughtiness

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-08-26 20:59:24
1.你是怎么确定转化进宿主菌了呢?PCR?还是测序?一般PCR是不太靠谱的,有可能是假阳性。
2.光SDS-PAGE分析是不够的,一般酵母摇瓶小试的话,蛋白表达量是比较低的,可以考虑用WB进一步确定。
3.发酵条件有没有优 ...

您好,我最近发现蛋白表达了,但是却没有活力。以前目的基因在大肠杆菌中是有活力的,现在为了完成分泌表达的任务,让目的基因在酵母中表达,但是现在的问题是蛋白表达了,条带很浓,但就是没有活力。呜呜呜……不知道该怎么办了
3楼2013-10-20 15:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doughtiness 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +13 Lanmanbaby 2026-08-09 21/1050 2026-08-10 14:16 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见