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zhouni923219

铜虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母重组子的筛选

各位大虾们好,我做的是毕赤酵母,由于转化时载体片段越大就越难整合,但是我又不想用pPICZα载体,所以我想用对pPIC9K载体进行改造,将他缩小,His基因很大,可不可以将His去掉,宿主菌不用组氨酸缺陷型,直接利用G418抗性筛选重组子呢?请求各位知道。
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坚持,加油!
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嘉笛

木虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhouni923219: 金币+2 2013-06-18 16:37:30
G418筛选不容易筛到阳性菌落
2楼2013-01-23 11:31:08
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zhouni923219

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 嘉笛 at 2013-01-23 11:31:08
G418筛选不容易筛到阳性菌落

想再请问您一下可以吗?为什么pPICZα载体可以直接用Zeocin筛选阳性克隆呢?这只是两种抗生素药性强弱的问题吗?
坚持,加油!
3楼2013-01-23 15:43:50
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嘉笛

木虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhouni923219: 金币+5, 谢谢您 2013-01-24 10:34:22
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-01-25 09:26:26
zhouni923219: 金币+2, 有帮助 2013-02-26 10:56:15
zhouni923219: 金币+1 2013-06-18 16:37:41
pPICZa载体转化后没有组氨酸抗性转化得到的重组菌落直接进行诱导表达,如果pPIC9K载体去掉His,理论上转化子会很少,不利于后期筛选高拷贝重组子
4楼2013-01-24 09:09:23
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ytufjrong

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好,你有pPICZα-C吗,可否惠赠一些?
5楼2013-02-18 11:48:05
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zhouni923219

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ytufjrong at 2013-02-18 11:48:05
您好,你有pPICZα-C吗,可否惠赠一些?

不好意思,我没有哦
坚持,加油!
6楼2013-02-26 10:55:34
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