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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 毕赤酵母重组子的筛选
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zhouni923219

铜虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母重组子的筛选

各位大虾们好，我做的是毕赤酵母，由于转化时载体片段越大就越难整合，但是我又不想用pPICZα载体，所以我想用对pPIC9K载体进行改造，将他缩小，His基因很大，可不可以将His去掉，宿主菌不用组氨酸缺陷型，直接利用G418抗性筛选重组子呢？请求各位知道。
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坚持，加油！
1楼 2013-01-22 15:32:02
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嘉笛

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhouni923219: 金币+2 2013-06-18 16:37:30
G418筛选不容易筛到阳性菌落
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2楼2013-01-23 11:31:08
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zhouni923219

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 嘉笛 at 2013-01-23 11:31:08
G418筛选不容易筛到阳性菌落

想再请问您一下可以吗？为什么pPICZα载体可以直接用Zeocin筛选阳性克隆呢?这只是两种抗生素药性强弱的问题吗？
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坚持，加油！
3楼2013-01-23 15:43:50
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嘉笛

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhouni923219: 金币+5, 谢谢您 2013-01-24 10:34:22
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-01-25 09:26:26
zhouni923219: 金币+2, ★有帮助 2013-02-26 10:56:15
zhouni923219: 金币+1 2013-06-18 16:37:41
pPICZa载体转化后没有组氨酸抗性转化得到的重组菌落直接进行诱导表达，如果pPIC9K载体去掉His，理论上转化子会很少，不利于后期筛选高拷贝重组子
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4楼2013-01-24 09:09:23
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ytufjrong

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好，你有pPICZα-C吗，可否惠赠一些？
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5楼2013-02-18 11:48:05
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zhouni923219

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ytufjrong at 2013-02-18 11:48:05
您好，你有pPICZα-C吗，可否惠赠一些？

不好意思，我没有哦
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坚持，加油！
6楼2013-02-26 10:55:34
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