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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教Western blot问题
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yuyang031985

金虫 (正式写手)

[求助] 请教Western blot问题 已有1人参与

最近在做Western blot，提取耐药细胞的p-gp蛋白，文献报道理论分子量170kd，我们跑出来的分子量130kd左右，而且还不确定是不是该条带，请高人指点哪里有可能出问题？？

已使用过的抗体：Abcam的p-gp抗体（兔抗、鼠抗都用过）；博士德的p-gp抗体
胶的浓度：6%、8%、10%和12%都使用过；
裂解液：碧云天的强、中强、弱的裂解液都试过；
提蛋白的方法：总蛋白和膜蛋白的提取都尝试过；
使用的膜：0.22微米的PVDF膜
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说说你不开心的事让我们开心一下哈！
1楼 2013-08-07 16:33:57
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酷哥哥1990

金虫 (小有名气)
我也是做耐药细胞中P-糖蛋白表达的，也遇到了和你一样的问题。。。。请问你这个问题解决了吗？还有就是膜蛋白你是怎么提取的？
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9楼2014-02-24 14:40:06
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hongyongbo

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
该蛋白是否有亚基，在提取纯化过程中降解导致少了40KD
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2楼2013-08-07 21:08:26
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hongyongbo

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还要考虑下可变剪切
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3楼2013-08-07 21:09:04
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biowandy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问具体蛋白是什么名字？可以上uniprot研究下蛋白特性，
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4楼2013-08-07 21:59:09
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