| 查看: 1902 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
yuyang031985金虫 (正式写手)
|
[求助]
请教Western blot问题 已有1人参与
|
||
|
最近在做Western blot，提取耐药细胞的p-gp蛋白，文献报道理论分子量170kd，我们跑出来的分子量130kd左右，而且还不确定是不是该条带，请高人指点哪里有可能出问题？？ 已使用过的抗体：Abcam的p-gp抗体（兔抗、鼠抗都用过）；博士德的p-gp抗体 胶的浓度：6%、8%、10%和12%都使用过； 裂解液：碧云天的强、中强、弱的裂解液都试过； 提蛋白的方法：总蛋白和膜蛋白的提取都尝试过； 使用的膜：0.22微米的PVDF膜 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot伯乐电泳仪的问题请教！谢谢大家！
已经有3人回复
- 10kd 和100kd的蛋白同时做western blot
已经有11人回复
- western blot 条带
已经有15人回复
- western blot 半干式电转转不上问题！！快来帮帮忙啊！！
已经有13人回复
- 关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
已经有8人回复
- 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的
已经有11人回复
- Western Blot出现问题
已经有19人回复
- western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。
已经有13人回复
- 求助，Western-Blot转膜不成功
已经有22人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- western blot 请教
已经有10人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- Western-blot 膜封闭时间？
已经有7人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用
已经有8人回复
- 【求助/交流】westernblot
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出来，不知道原因，大侠给分析一下啊！？
已经有13人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
jiang701820
银虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 587.3
- 散金: 15
- 帖子: 98
- 在线: 113.3小时
- 虫号: 1943252
- 注册: 2012-08-17
- 专业: 心脏结构与功能异常
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 改蛋白是否还有其他修饰，我之前也有过这样的经历，文献报道在120kDa，但是我做出来始终在56kDa，而且我买的抗体说明书上也是写的56kDa，这些抗体做出来再120kDa也没有条带，后来查了文献发现这个蛋白存在糖基化，糖基化后分子量会达到120kDa，所以你可以查一下你现在这个蛋白的氨基酸序列，算一下大概有多少Kda，如果说氨基酸序列算出来有170kDa的话，那可能你的实验确实存在一定问题，考虑换其他公司的抗体，另外建议用0.45uM的PVDF膜，因为该蛋白的分子量比较大。如果氨基酸序列算出来的分子量在130kDa左右的话可能是该蛋白存在其他修饰。 |
5楼2013-08-07 22:09:32
hongyongbo
铜虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1497.8
- 散金: 415
- 红花: 4
- 帖子: 379
- 在线: 242.5小时
- 虫号: 1194335
- 注册: 2011-01-22
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2013-08-07 21:08:26
hongyongbo
铜虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1497.8
- 散金: 415
- 红花: 4
- 帖子: 379
- 在线: 242.5小时
- 虫号: 1194335
- 注册: 2011-01-22
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
3楼2013-08-07 21:09:04
biowandy
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4752.3
- 散金: 689
- 红花: 4
- 帖子: 627
- 在线: 157.8小时
- 虫号: 382870
- 注册: 2007-05-25
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
4楼2013-08-07 21:59:09
40