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T载体连接不上去
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fanwq258
木虫
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虫号: 1694785
[交流]
T载体连接不上去
自己扩增的基因,连接T载体就是连不上,但是买载体时带的插入片段可以连接上,这可该怎么办呢?
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1楼
2013-08-05 09:53:35
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zhaihong1983
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连不上是什么意思?是没有菌落长出来还是,有单菌落,但是鉴定后发现不是?
如果是没有菌落,那你的PCR产物是什么酶P出来的,如果是高保真酶,你的PCR产物加T处理了吗?没加T肯定连不上。
如果有很多菌落,但是鉴定后不是,那你的PCR产物是做的胶回收吗?如果没做胶回收直接连的话,很容易连上的都是引物二聚体。
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19楼
2013-08-16 13:18:23
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gyesang
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你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
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2楼
2013-08-05 13:35:34
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fanwq258
木虫
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2楼
:
Originally posted by
gyesang
at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
不是高保真的酶,用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼
2013-08-05 14:51:24
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hyphen007
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考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼
2013-08-05 15:24:40
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