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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体连接不上去
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] T载体连接不上去

自己扩增的基因，连接T载体就是连不上，但是买载体时带的插入片段可以连接上，这可该怎么办呢？
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1楼 2013-08-05 09:53:35
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？

不是高保真的酶，用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼2013-08-05 14:51:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？
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2楼2013-08-05 13:35:34
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hyphen007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼2013-08-05 15:24:40
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flyhigh805

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+5, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-08-05 18:28:46
amisking: 回帖置顶 2013-08-05 18:28:48
你的目的片段大小是多少啊，太大的话连T载可能有点困难，但是只要优化连接条件连上去应该很容易的。应尝试提高PCR产物的浓度，可以取少量PCR产物电泳检测如果大小正确的话剩下的PCR产物直接过胶回收的柱子，这样得到的PCR产物浓度高，另外增加连接时间16℃过夜或4℃过夜。
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5楼2013-08-05 17:16:03
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