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新虫 (初入文坛)

[求助] 急!各位帮忙看看,PCR后跑的琼脂糖凝胶电泳图,条带不清晰原因是什么?

各位大侠好,本人刚开始做PCR,帮忙分析一下电泳条带不清晰的原因吧。
图中从左到右是同一DNA模板,不同引物,同一RCR条件的产物
出现这种情况什么原因呢?说明模板有问题?还是需要改变PCR条件,或者增加镁离子浓度?
急!各位帮忙看看,PCR后跑的琼脂糖凝胶电泳图,条带不清晰原因是什么?
DNA.jpg
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1058744774

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-30 23:20:50
是用gDNA为模板?引物的退火温度优化了没有?

是gDNA.退火温度是36℃,40个循环。优化退火温度是根据这个公式吗?Tm=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8)
7楼2013-07-31 09:51:46
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查看全部 17 个回答

TPR有点叼

金虫 (正式写手)



myprayer: 金币+1, 分子生物期待你得精彩! 2013-07-30 23:16:33
路过。听说不亮,不清晰也有没P好的原因。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-07-30 22:59:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是用gDNA为模板?引物的退火温度优化了没有?
3楼2013-07-30 23:20:50
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rth1983

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-07-31 14:03:52
你是在筛选引物吗?有的时候一些引物扩出来就这个样子,需要重新设计。不过如果你能确定这个引物扩增你的样品可以获得清晰的条带,可以优化一下PCR条件。镁离子浓度啥的到不用改,体系就用你们实验室的成熟的体系。可以优化下退火温度,时间等。不过有的时候模板不好也会这样。。
4楼2013-07-31 03:21:28
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