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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录PCR时基因特异引物与oligo(dT)有何差别
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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR时基因特异引物与oligo(dT)有何差别

近期在通过qRT-PCR测定RNAi植株中目的基因的表达情况，始终无法获得较好的溶解曲线，得不到Ct值，反转录用的是oligo(dT)，cDNA质量检测过，没有问题，烦请各位提供解决方案，用基因特异引物效果会如何？急求，拜谢。
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1楼 2013-07-29 11:02:27
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
oligo（dt）反转录肯定比较好啊 ，它是跟RNA的3‘da结合的 。
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2楼2013-07-29 15:18:44
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-07-29 15:18:44
oligo（dt）反转录肯定比较好啊 ，它是跟RNA的3‘da结合的 。

谢谢，这个了解到了。其他疑问有何高见？
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3楼2013-07-29 23:29:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 10:10:23
faile18: 金币+2 2013-08-06 22:13:04
可以试试用3'特异引物。用oligodT当然是通用的，但所有mRNA竞争引物，当目的基因的转录水平低，有时反转录后cDNA的模板量不够。
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4楼2013-07-29 23:42:01
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
faile18: 金币+2 2013-08-06 22:13:14
是不是因为楼主的RNAi很成功所以根本做不出目标基因的PCR了.....
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5楼2013-07-30 00:34:28
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
I usually use hexamer random primer to do the cDNA synthesis.
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immunologyparasite
6楼2013-07-30 07:53:24
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-29 23:42:01
可以试试用3'特异引物。用oligodT当然是通用的，但所有mRNA竞争引物，当目的基因的转录水平低，有时反转录后cDNA的模板量不够。

谢谢，问题找到了，cDNA质量不行，已经重新做了
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7楼2013-08-06 22:10:40
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-30 00:34:28
是不是因为楼主的RNAi很成功所以根本做不出目标基因的PCR了.....

起初我也曾这么想过，后来发现是cDNA质量不行。RNAi好像还没有强大到基因敲除的效果吧。
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8楼2013-08-06 22:12:47
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by robustli at 2013-07-30 07:53:24
I usually use hexamer random primer to do the cDNA synthesis.

用hexamer random还是很少听说过，可否介绍下您这样做的原因或者说理由是什么
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9楼2013-08-06 22:14:17
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